牛棒杆菌PCR检测试剂盒说明书

特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：产品仅用于科研检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
     5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
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服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
L-酪氨酸甲酯/H-Tyr-Ome 质量规格：>98%,日本进口原装 包装;5g

L-正缬氨酸/L-2-氨基戊酸/L-原缬氨酸/L-正穿心排草氨基酸/L-(+)-2-氨基戊酸/L-Norvaline 质量规格：>98%,BR 包装;1g

D-正缬氨酸/D-2-氨基戊酸/D-原缬氨酸/D-正穿心排草氨基酸/R-2-氨基戊酸/D-Norvaline 质量规格：>98%,BR 包装;5g

D-正亮氨酸/D-正白氨酸/D-2-氨基己酸/D-Norleucine 质量规格：飞蓟素UV 80%；单宾30% 包装;1g

L-正亮氨酸/L-正白氨酸/L-原亮氨酸/L-原闪白氨基酸/L-2-氨基正己酸/L-2-氨基己酸/L-Norleucine 质量规格：飞蓟素UV 80%；双宾30% 包装;5g

DL-正亮氨酸/DL-正白氨酸/DL-正闪白氨基酸/DL-己氨酸/DL-原亮氨酸/DL-2-氨基正己酸/2-氨基己酸/DL-Norleucine 质量规格：BR，20%溶液 包装;250mg

L-茶氨酸/N-乙基-L-谷氨酰胺/N-(γ-谷氨酰基)乙胺/麩胺酸-γ-单乙基盐胺/麩胺酸-γ-乙盐胺/L-Theamine 质量规格：HPLC>97%,标准品 包装;100mg

L-组氨酸/(S)-2-氨基-3-(4-咪唑基)丙酸/L-α-氨基-β-4-咪唑基丙酸/L-组织氨基酸/α-氨基-1H-咪唑-4-丙酸/咪唑-5-α-丙氨酸/L-Histidine 质量规格：>98% 包装;100mg

D-组氨酸/D-2-氨基-3-(4-咪唑基)丙酸/D-组织氨酸/D-甘噁啉-5-闪氨酸/D-甘恶啉-5-丙氨酸/D-组织氨基酸/D-Histidine 质量规格：BR，27U/mg,进分 包装;5g

DL-组氨酸/(±)-2-氨基-3-(4-咪唑基)丙酸/DL-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸/DL-组织氨基酸/DL-Histidine 质量规格：BR，27U/mg,进分 包装;1g

DL-组氨酸盐酸盐/DL-氢氯组氨酸/DL-α-氨基-β-(4-咪唑基)丙酸单盐酸盐/DL-Histidine HCL H2O 质量规格：>99%,BR 包装;1g

D-组氨酸盐酸盐/D-氢氯组氨酸/D-α-氨基-β-(4-咪唑基)丙酸单盐酸盐/D-Histidine monohydrochloride monohydrate 质量规格：>98%,BR 包装;250mg

L-组氨酸盐酸盐/盐酸组氨酸/L-氢氯组氨酸/L-Histidine HCL 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;1g

L-组氨酸盐酸盐一物/盐酸组氨酸/L-氢氯组氨酸一物/L-Histidine HCL H2O 质量规格：HPLC≥99%，标准品 包装;5g

BOC-Nim-苄基-L-组氨酸/BOC-Nim-benzyl-L-Histidine 质量规格：>90%,BR 包装;5g

L-丝氨酸/L-蚕丝氨基酸/L-2-氨基-3-羟基丙酸/L-β-羟基丙氨酸/L-Serine 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;100g

L-丝氨酸甲酯盐酸盐/H-Ser-Ome•HCl 质量规格：>99%,BR 包装;25g
牛棒杆菌PCR检测试剂盒说明书Paenibacillus│agaridevorans 中文名称：食琼脂类芽孢杆菌种属:Paenibacillus│agaridevorans分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物模式菌株:no培养方法培养基:LB生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：97%

Rhizobium│etli 中文名称：埃特*瘤菌种属:Rhizobium│etli分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:476生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：97%

Micromonospora│auratinigra 中文名称：金黑小单胞菌种属:Micromonospora│auratinigra分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:GYM生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：98%

Sinorhizobium meliloti 中文名称：苜蓿中华根瘤菌种属:Sinorhizobium meliloti提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:3.48% NaCl生长与庆阳苜蓿共生固氮培养方法培养基:根瘤菌YMA培养基:：KH2PO4 0.25 g,K2HPO4 0.25 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,NaCl 0.1 g,酵母提取物 0.8 g,甘露醇 10.0 g,琼脂 18.0 g,蒸馏 1.0 L,pH 7.2，121℃，15min。生长条件:28-30℃，3-5天斜面培养存储条件:真空冷冻干燥法；矿物油法；定期移植法 纯度：98%

Alcaligenes│xylosoxidans 中文名称：木糖氧化产碱杆菌种属:Alcaligenes│xylosoxidans分离基物:医疗用品提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:研究，培养方法培养基:2生长条件:33℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：from Penicillium brefeldianum, ≥98% (HPLC)

Bacillus│aquimaris 中文名称：沙地芽孢杆菌种属:Bacillus│aquimaris分离基物:土壤提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:分类、研究，具有处理富营养体和养殖废潜力。培养方法培养基:2生长条件:28℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：97%

Macrococcus│caseolyticus 中文名称：解酪蛋白巨大球菌种属:Macrococcus│caseolyticus分离基物:土壤提供形式:斜面培养物安全等级:2模式菌株:no培养方法培养基:2生长条件:30℃存储条件:-80℃冰箱冻结法 纯度：97%

Edwardsiella│tarda 中文名称：迟钝爱得华氏菌种属:Edwardsiella│tarda分离基物:短鳍红娘鱼肠胃道提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:饲料用植酸酶等的筛选培养方法培养基:2生长条件:37℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：98%