客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 产品名称 | 等孢球虫通用探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Isospora spp. | 货号 | YSP96858 |
荧光定量PCR试剂盒技术: 产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 样品RNA的抽提: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 9-溴蒽(>95.0%(GC))1-溴-3,5-二氟 1-溴蒽(>97.0%(GC))氟化 2-溴蒽(>97.0%(GC))氨基吡啶 9,10-双(二基膦甲基)蒽(>98.0%(GC))三氟化四络合物 9-溴蒽(>99.0%(GC)(HPLC))1,5-二氨基戊烷 2-溴-9,10-二基蒽(>95.0%(GC))环己甲酸甲酯 9-溴-10-基蒽(>98.0%(GC))丁酰 2-蒽(>98.0%(GC))硫 9,10-二蒽(>96.0%(GC))N,N-二甲酰二甲基缩 1,5-二溴蒽(>97.0%(GC))化甲醯 1,8-二蒽(>98.0%(GC))叠氮基*基硅烷 9-基蒽(>98.0%(GC))2-氨基噻吩-羧酸甲酯 N-基-9-蒽(>98.0%(GC))溴 10-基-9-蒽酸(包含数量不等的酸酐)2,6-二甲酰 1-(溴基)萘(>98.0%(GC))6-吡啶-2-羧酸 1-萘(>98.0%(GC))10-甲氧基亚氨基芪 1-萘酸(含有数量不等的酸酐)炔酸 2-萘酸(含有数量不等的酸酐)碳酸钙 等孢球虫通用探针法荧光PCR检测试剂盒细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体IRF-4/FITC 荧光素标记干扰素调节因子4抗体IgG100 ul 钙粘蛋白23抗体IRF7 /FITC 荧光素标记干扰素调节因子7抗体IgG100 ul 细胞色素p450 2s1抗体Phospho-IRF7 (Ser471/472) /FITC 荧光素标记酸化干扰素调节因子7抗体IgG100 ul 细胞角蛋白16抗体IRS-1/FITC 荧光素标记胰岛素受体底物-1抗体IgG100 ul 半胱酸蛋白酶蛋白-6抗体phospho-IRS1(Tyr895)/FITC 荧光素标记酸化胰岛素受体底物-1抗体IgG100 ul c-fos抗体phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC 荧光素标记酸化胰岛素受体底物-1抗体IgG100 ul 9号染色体开放阅读框23抗体phospho-IRS1(Ser1101)/FITC 荧光素标记酸化胰岛素受体底物-1抗体IgG2.5 mg 9号染色体开放阅读框25抗体phospho-IRS1(Ser302) /FITC 荧光素标记酸化胰岛素受体底物-1抗体IgG100 ul 9号染色体开放阅读框30抗体phospho-IRS1(Ser332/336)/FITC 荧光素标记酸化胰岛素受体底物-1抗体IgG20 ul 实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |