荧光定量PCR试剂盒技术: 产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 产品名称 | 兽类嗜衣原体探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Chlamydophila pecorum | 货号 | YSP96543 |
样品RNA的抽提: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 2-(三氟甲基)吡啶-甲酸(97%)Ambra1 Antibody6-氟烟酸 3,5-二甲酰氯(98%)eIF4A1 Antibody氟-2- 3,5-二甲酰氯(99%,用于HPLC衍生标记)eIF4A1 Antibody四氢-2H-吡喃- N-甲基-N-(*基硅基)乙酰(97%)Phospho-IRS-1 (Ser302) (34C7) Rabbit mAb2-氨基-并噻唑 苔黑酚一水合物(98%)MAVS (D5A9E) Rabbit mAb顺-1,二氯-2- N,O-双(*基硅烷基)乙酰(95%)SirT1 (D739) Antibody二羰基环戊二钴 四基乙(AR)MALT1 Antibody邻二酰 1-(三氟乙酰)咪唑(用于GC衍生化,≥98.5%)NF-κB1 p105/p50 (D4P4D) Rabbit mAb (PE Conjuga)1,9-二溴壬烷 二硫化碳(低级,≥99.9%)NCBP1/CBP80 (D7Z2Z) Rabbit mAb叔丁基酸-2,二甲基丁二酯 二硫化碳(ACS,≥99.9%)SirT1 (C14H4) Rabbit mAb1-Boc-甲氨基哌啶 2,二溴酰(98%)SirT1 (C14H4) Rabbit mAb5,10,15,20-四(吡啶基)卟啉 二环己(DCHA)(用于滴定法测定异酸酯,≥99.5%(GC))LRRC8A/SWELL1 Antibody5-氯-2-酰氯噻吩 煤油(试剂级)FoxO3a (75D8) Rabbit mAb2-氯噻吩-5-甲酸 石油(AR,bp 60-90 °C)eIF4G Antibody炔 石油(AR,bp 30-60 °C)FoxO4 (55D4) Rabbit mAbN,N-二甲基酰 石油(AR,bp 90-120 °C)Phospho-SF3B1 (Thr313) (D8D8V) Rabbit mAbN-甲酰乙 1,1,2-三氯三氟乙烷(CFC-113)(99.5%)VE-Cadherin (D87F2) XP® Rabbit mAb2-(二甲氨基)-2-甲基-1- 滑石粉(800目)VE-Cadherin (D87F2) XP® Rabbit mAb2,6-二溴 兽类嗜衣原体探针法荧光PCR检测试剂盒Dicer-1 ELISA试剂盒MIP-1 Beta 巨噬细胞炎症因子1β 抗体100 ul DAB2互作蛋白(DAB2IP)ELISA试剂盒MIP4/CCL18 巨噬细胞炎症蛋白18抗体100 ul C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)ELISA试剂盒MITF 小眼相关转录因子抗体100 ul C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒MMP-1 基质金属蛋白酶-1抗体100 ul C多肽(CP)ELISA试剂盒MMP-1 基质金属蛋白酶-1抗体100 ul CXC趋化因子受体7(CXCR7)ELISA试剂盒MMP-2 基质金属蛋白酶-2抗体100 ul CXC趋化因子受体4(CXCR4)ELISA试剂盒MMP-3 基质金属蛋白酶-3抗体100 ul CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA试剂盒MMP-7 基质金属蛋白酶-7抗体100 ul CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISA试剂盒MMP-8 基质金属蛋白酶-8抗体20 ul |