样品RNA的抽提: ①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 产品名称 | 鲤疱疹病毒2型探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Cyprinid Herpesvirus(CyHV-II) | 货号 | YSP96607 |
实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 荧光定量PCR试剂盒技术: 本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 (S)-(+)-DBD-APy [=(S)-(+)-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(氨基吡咯烷-1-基)-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC))CDT1 Antibody化钠 (R)-(-)-DBD-APy [=(R)-(-)-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(氨基吡咯烷-1-基)-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC))Cdc6 (C42F7) Rabbit mAbN甲酰基胞嘧啶 (S)-(+)-NBD-APy [=(S)-(+)-硝基-7-(氨基吡咯烷-1-基)-2,1,并恶二唑](>99.0%(LC))Cdc6 (C42F7) Rabbit mAb1-溴-3,4,5-*氧基 (R)-(-)-NBD-APy [=(R)-(-)-硝基-7-(氨基吡咯烷-1-基)-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC)) RRM1 Antibody2-氨基-4,5-二甲氧基甲酸甲酯 (S)-(-)-DBD-Pro-COCl [=(S)-(-)-(N,N-二甲氨基磺酰基)-7-(2-氯甲酰四氢吡咯-1-基)-2,1,并恶二唑](>90.0%(HPLC))LPP (8B3A11) Mouse mAbN,N-二甲基酰 (R)-(+)-DBD-Pro-COCl [=(R)-(+)-(N,N-二甲氨基磺酰基)-7-(2-氯甲酰四氢吡咯-1-基)-2,1,并恶二唑](>95.0%(HPLC))Vimentin (5G3F10) Mouse mAb2-氨基-甲 (S)-(-)-NBD-Pro-COCl [=(S)-(-)-硝基-7-(2-氯甲酰四氢吡咯-1-基)-2,1,并恶二唑]Phospho-c-Kit (Tyr719) AntibodyN-乙基-2-吡咯烷酮 (R)-(-)-DBD-Py-NCS [=(R)-(-)-(N,N-二甲氨基磺酰基)-7-(异硫酸基四氢吡咯-1-基)-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC))Phospho-c-Kit (Tyr719) Antibody羧基酸频那酯 (S)-(+)-DBD-Py-NCS [=(S)-(+)-(N,N-二甲氨基磺酰基)-7-(异硫酸基四氢吡咯-1-基)-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC))Phospho-c-Kit (Tyr719) Antibody吡唑酸频哪酯 (R)-(-)-NBD-Py-NCS [=(R)-(-)-(异硫酸基吡咯烷-1-基)-7-硝基-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC))RYBP Antibody吡唑酸频哪酯 (S)-(+)-NBD-Py-NCS [=(S)-(+)-(异硫酸基吡咯烷-1-基)-7-硝基-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC))c-Kit Antibody8-溴-1-辛 Nα-(5-氟-2,二基)-L-氨酰(>95.0%(HPLC))JMJD2A (C70G6) Rabbit mAbbeta-氨酸苄酯对甲磺酸盐 甲酰氯(>98.0%(GC)(T))SWAP70 (D5O6A) Rabbit mAb2-溴-5-甲氧 甲氧基甲酰氯(>98.0%(GC)(T))NHERF1 (A310) Antibody2-(2-氨乙基)吡啶 甲酰氯(>98.0%(GC)(T))Branched Ubiquitin Antibody Sampler Kit2,5-二氟酚 DAABD-Cl [=[2-(二甲氨基)乙氨基磺酰]-7-氯-2,1,并恶二唑LRP6 (C47E12) Rabbit mAb3,二氟酚 2,二肼(加约50%水湿润,本品干重分别为约25g和500g)(>98.0%(HPLC)) LRP6 (C47E12) Rabbit mAb2-溴-氯甲 2,二氢-6-异硫酸基-1,酞二酮(>96.0%(HPLC))TCF8/ZEB1 (D80D3) Rabbit mAb吲唑 鲤疱疹病毒2型探针法荧光PCR检测试剂盒甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)ELISA试剂盒Raptor mTOR相关调控蛋白抗体100 ul 甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒Phospho-Raptor (Ser792) 酸化mTOR相关调控蛋白抗体100 ul 甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒RALDH2 视黄脱氢酶2型抗体100 ul 甲羟戊酸5-焦酸脱羧酶(MDD)ELISA试剂盒phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 酸化原癌基因c-Raf抗体20 ul 极低密度脂蛋白(VLDL)ELISA试剂盒phospho-c-Raf (Ser289) 酸化原癌基因c-Raf抗体100 ul 激肽原(KNG)ELISA试剂盒phospho-c-Raf (Ser259) 酸化原癌基因c-Raf抗体500 ul 激动异构酶/细胞分裂素MB(CKMB)ELISA试剂盒phospho-c-Raf (Ser296) 酸化原癌基因c-Raf抗体100 ul 基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒phospho-c-Raf (Ser338) 酸化原癌基因c-Raf抗体300 ul 基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒RASGRF1 Ras特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1100 ul |