荧光定量PCR试剂盒技术: 产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 产品名称 | 弗氏柠檬酸杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Citrobacter freundii | 货号 | YSP96550 |
样品RNA的抽提: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 1,2,4,5-四(NMR定量标准品,99.8%(GC))Acetyl-Histone H2A (Lys5) Antibody2-氟-溴乙 熔点标准品(+235 to +237℃)Phospho-Histone H2A.X (Ser139) Antibody2-基-4'-甲基联 1,(标准品)Phospho-Histone H2A.X (Ser139) Antibody1-Boc-羟甲基吡咯烷 二硫化四甲基秋兰姆(标准品)Histone H2A Antibody II()戊二酸单酰 正己烷标准溶液(1000μg/ml,基体:甲)GIRK2 (D6C2T) Rabbit mAb2-氟-吡啶 顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六酸(标准品)Ribosomal Proin S3 Antibody(2R)-(-)-缩水甘油基对甲磺酸酯 二甲硝咪唑(标准品)MAGE-A3 Antibody4,6-二甲氧基-2-甲磺酰基嘧啶 N-(2-羟乙基)乙二-N,N′,N′-三乙酸 三钠盐 溶液(~41% in H2O (T))Keratin 5 (D4U8Q) Rabbit mAb4,4'-二甲基-2,2'-联吡啶 青霉素V(标准品)Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb (PE Conjuga)2,二氟苄基溴 2-NP-AOZ(标准品)Phospho-IRS-1 (Ser332/336) Antibody基甲酸甲酯 磺醋酰(标准品)Phospho-PP1α (Thr320) Antibody3,二氟肉桂酸 磺喹噁啉(标准品)SPAR (D9P9T) Rabbit mAb氯酯 磺氯吡(标准品)PP1α Antibody硫酸阿托品 泰妙菌素(标准品)GLI2 (R770) Antibody2,5-二氯对二甲 甲酸铵(用于质谱,≥99.0%)IGFBP3 (D1U9C) Rabbit mAb2-溴噻唑-甲酸乙酯 甲(色谱级, ≥99.5%(GC))PCNA (PC10) Mouse mAb2-羟基-甲基吡啶 甲基叔丁基(农残级,≥99.9%(GC))PCNA (PC10) Mouse mAb二氨基蓝 BB 甲基叔丁基(GC,≥99.9%(GC))TORC1/CRTC1 (C71D11) Rabbit mAb茉莉酸 弗氏柠檬酸杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒MuRF1/Trim63 肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1抗体100 ul B细胞κ 轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(NFKBIE)ELISA试剂盒MyD88 髓样分化蛋白抗体20 ul B群链球菌多糖抗体(IgG)ELISA试剂盒NIPP1/ARD1 核抑制蛋白酸酶1抗体100 ul B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA试剂盒Myelin Proin Zero 外周髓脂P0蛋白/P0蛋白抗体100 ul B淋巴细胞抗原(CD20)ELISA试剂盒PMP2 周围神经髓鞘蛋白2抗体100 ul blca-4 ELISA试剂盒MYSM1 MYSM1抗体100 ul blca-1 ELISA试剂盒MYOZ/MYOZ1 MYOZ抗体100 ul Bcl-2样蛋白1(BCL2L1)ELISA试剂盒MyoD1/Myf3 肌原调节蛋白抗体100 ul B7-H4 ELISA试剂盒SM Myosin (Smooth Muscle) 心肌肌凝蛋白(平滑肌) 单抗20 ul |