客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 产品名称 | 马鼻炎病毒探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Equine Rhinitis Virus | 货号 | YSP96695 |
荧光定量PCR试剂盒技术: 产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 样品RNA的抽提: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 3,二甲氧基肉桂酸(标准品)NF-κB1 p105 Antibody2-乙基酸 头孢地钠NF-κB1 p105 Antibody托可索仑 头孢地尼Aurora A/AIK (1G4) Rabbit mAb聚乙吡咯烷酮 Boc-D-谷氨酰Aurora A/AIK (1G4) Rabbit mAb羧甲基纤维素 赤霉素A4+7Snail (SN9H2) Rat mAb邻氨基噻吩(2盐酸) Alectinib;CH54248024F2hc/CD98 (D3F9D) XP® Rabbit mAb双三氟磺酰亚锂 对甲氧基肉桂酸TRAF2 (C192) Antibody壳聚糖 5-羟基色盐酸盐,血清盐酸盐TRAF2 (C192) Antibody2,二氯-7H吡咯[2,D]嘧啶 巨大戟(标准品)p48 Primase (8G10) Rat mAb2-氟-6-甲酸 阿糖尿苷;1-β-D-阿糖呋喃脲嘧啶p58 Primase (8D3) Rat mAb2-基丁酸 β-香树素(标准品)c-Rel Antibody甲基伞形酮 头孢磺啶钠c-Rel Antibody6-HYDROXY-PYRIDINEBORONIC ACID 邻二甲β2-Chimerin (2E3) Rat mAb氯-5-氟甲 醋酸美伦孕酮; 甲雌乙酸酯TRAF3 Antibody鹰爪豆 胆固酯酶;胆甾酯酶TRAF3 Antibody邻氨基联 1,9-吡唑并蒽酮;SP600125Pim-2 (D1D2) Rabbit mAb蒽酮 别隐品;A-别隐品(标准品) Pim-2 (D1D2) Rabbit mAb(S)-疏基吡咯烷-1-基)亚乙基氨酸对硝基苄酯 LGD-4033 ORC1 (7A7) Rat mAb3,4,5-*氧基肉桂酸 马鼻炎病毒探针法荧光PCR检测试剂盒鱼胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒Apo-E/FITC 荧光素标记载脂蛋白E抗体IgG20 ul 鱼催素(PRL/LTH)ELISA试剂盒ApoH/FITC 荧光素标记载脂蛋白H抗体IgG300 ul 鱼促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒Apollon/FITC 荧光素标记Apollon凋亡抑制蛋白抗体IgG100 ul 鱼促甲状腺素(TSH)ELISA试剂盒APP/FITC 荧光素标记APP淀粉样肽前体蛋白抗体IgG100 ul 鱼雌二(E2)ELISA试剂盒phospho-APP(phospho Thr668) /FITC 荧光素标记兔抗、大、APP淀粉样肽前体蛋白(p-APP Thr668)抗体IgG100 ul 鱼超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒APP695/770 /FITC 荧光素标记淀粉样肽前体蛋白抗体IgG100 ul 鱼补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒APPL1/FITC 荧光素标记抗衔接因子蛋白含pH域酸酪氨酸结合域和亮氨酸拉链基元1抗体IgG100µl 鱼补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒APS/FITC 荧光素标记兔抗、大、APS抗体IgG100 ul 鱼胞浆型脂酶A2A(cPLA2A)ELISA试剂盒APS(Ser598)/FITC 荧光素标记酸化APS抗体IgG100 ul 实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |