弗朗西斯菌通用PCR检测试剂盒说明书

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建

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特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：产品仅用于科研检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
     5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
四乙基氯化铵/氯化四乙铵/ N,N,N-三乙基乙铵氯化物/氯化四乙基铵/四乙铵化氯/TEAC 质量规格：1000μg/ml 包装;25g

四乙基化铵/化四乙铵/ N,N,N-三乙基乙铵化物/化四乙基铵/Tetraethylammonium iodide 质量规格：1000μg/ml 包装;500g

四甲基溴化铵/溴化四甲基铵/四甲替溴化铵/溴化四甲铵/四溴化物/TMAB 质量规格：500mg/L,溶剂： 包装;1g

四甲基氯化铵/氯化四甲基铵/氯化四甲铵/TMAC 质量规格：1000mg/L,基体: 包装;5g

四甲基化铵/化四甲基铵/N,N,N-*基-1-甲铵化物/化四甲铵/Tetramethylammonium iodide 质量规格：1000μg/ml 包装;5MG

四丁基氢氧化铵/三丁基-1-丁铵氢氧化物/氢氧化四丁基铵/N,N,N-三丁基-1-丁铵氢氧化物/Tetrabutyl ammonium hydroxide 质量规格：1000μg/ml 包装;1g

四正丁基氯化铵/N，N，N-三丁基-1-丁铵氯化物/四丁基氯化铵/氯化四丁铵/氯化四丁基铵/氯化四正丁基铵/TBAC 质量规格：1000μg/ml 包装;5g

四正丁基化铵/四丁基化铵/化四丁铵/N,N,N-三丁基-1-丁铵化物/TBAI 质量规格：1000µg/mL,基体：10%HCl 包装;1g

钼酸铵/四合钼酸铵/钼酸铵四合物/七钼酸铵/仲钼酸铵/Ammonium molybdate tetrahydrate 质量规格：1000μg/ml,溶剂:1.0Mol/L HNO3 包装;25g

磷酸烯醇酸单环己铵盐/磷酸烯醇酸单环己胺盐/磷酸稀醇单环已铵盐/磷酸烯醇酸/2-(膦酰氧基)酸环己胺盐/磷酸酸一环己铵盐/PEP 质量规格：1000µg/mL,基体:10%HCL 包装;5g

磷酸烯醇酸单钾盐/磷酸稀醇酸单钾盐/磷酸烯醇酸酯一钾/磷酸烯醇式酸单钾盐/PEP-K 质量规格：1000μg/ml,介质：1.0mol/L 硝酸 包装;100g

磷酸烯醇酸三环已胺盐/磷酸烯醇酸三环己胺盐/磷酸烯醇酸三(环已胺)盐/PEP-TRI/PEP-3CHA 质量规格：1000mg/L,溶剂：5%盐酸 包装;25g

碳酸铵/碳酸铵和氨基甲酸铵混合物/Ammonium carbonate 质量规格：500mg/L,溶剂：1%盐酸 包装;5g

磷酸二氢铵/一盐基磷酸铵/磷酸一铵/磷铵/磷酸二氢氨/Ammonium dihydrogen phosphate 质量规格：100μg/mL(20°C)，基体:5%HCl 包装;1g

磷酸氢二铵/二碱式磷酸铵/二盐基磷酸铵/磷酸二铵/磷酸氢铵/Ammonium hydrogen phosphate 质量规格：1000μg/ml,基体：1.0 mol/L 硝酸 包装;5g

磷酸铵/合磷酸三铵/三盐基磷酸铵/正磷酸铵/Triammonium phosphate trihydrate 质量规格：100mg/L(20℃)，基体：1％HCl 包装;100g

柠檬酸铵/枸橼酸铵/柠檬三铵/柠檬酸三铵/Triammonium citrate 质量规格：100µg/mL,,基体:1%HNO3 包装;25g
弗朗西斯菌通用PCR检测试剂盒说明书Rhizobium│soli 中文名称：土壤根瘤菌种属:Rhizobium│soli分离基物:样/CTD表层样提供形式:冻干物模式菌株:no应用领域:产酶微生物/产过氧化氢酶；未检测到蛋白酶、琼胶酶、淀粉酶和纤维素酶活性培养方法培养基:471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：98%

Sphingopyxis│chilensis 中文名称：智利含鞘氨醇盒菌种属:Sphingopyxis│chilensis分离基物:样/CTD表层样提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:产酶微生物/产过氧化氢酶；未检测到蛋白酶、琼胶酶、淀粉酶和纤维素酶活性培养方法培养基:471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：98%

Amphritea│atlantica 中文名称：大西洋美女神菌种属:Amphritea│atlantica分离基物:样/CTD表层样提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:产酶微生物/产过氧化氢酶；未检测到蛋白酶、琼胶酶、淀粉酶和纤维素酶活性培养方法培养基:471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%

Fictibacillus│rigui 中文名称：井假芽胞杆菌种属:Fictibacillus│rigui分离基物:沉积物/箱式沉积物提供形式:冻干物模式菌株:no应用领域:产酶微生物/产酪蛋白酶、淀粉酶、过氧化氢酶；未检测到果胶酶、纤维素酶、琼脂酶培养方法培养基:471生长条件:30℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%

Kocuria│marina 中文名称：海考克氏菌种属:Kocuria│marina分离基物:样/CTD表层样提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:产酶微生物/产过氧化氢酶和淀粉酶活性；未检测到琼胶酶、蛋白酶和纤维素酶活性培养方法培养基:471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%

Zhihengliuella│aestuarii 中文名称：潮滩刘志恒菌种属:Zhihengliuella│aestuarii分离基物:样/CTD表层样提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:产酶微生物/产过氧化氢酶和蛋白酶；未检测到琼胶酶、淀粉酶和纤维素酶活性培养方法培养基:471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：20-40目

Acinetobacter│nosocomialis 中文名称：不动杆菌（加词待译）种属:Acinetobacter│nosocomialis分离基物:沉积物/多管沉积物（0-5cm）提供形式:冻干物模式菌株:no应用领域:大洋细菌培养方法培养基:471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：95% (HPLC)

Marichromatium│sp. 中文名称：海洋着色菌种属:Marichromatium│sp.分离基物:样/下表层海提供形式:其它安全等级:1模式菌株:no应用领域:硫循环培养方法培养基:1004生长条件:25-35℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：98%