客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 产品名称 | 巴贝斯属虫通用探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Babesia spp. | 货号 | YSP96411 |
荧光定量PCR试剂盒技术: 产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 样品RNA的抽提: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 盐酸甲氧那明Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) Blocking Peptide2-氯噻吩-5-磺酰 (S)-1-基-1,2,3,四氢异喹啉 IRAK1 (D51G7) Rabbit mAb (Biotinylad)甲基磺酰苄溴 盐酸罗沙替丁醋酸酯Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)alpha-溴代-氯乙酮 培美曲塞酸Phospho-Akt (Ser473) Blocking Peptide2-溴-甲酸 培美曲塞酸(标准品)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) Blocking Peptide溴-氯甲 尼泊金甲酯;对羟基甲酸甲酯S6 Ribosomal Proin Blocking Peptide2-甲基巯基-5-溴嘧啶-羧酸 尼泊金酯;对羟基甲酸酯 Zap-70 Blocking Peptide5-氨基-1-甲基-1H-吲唑 周效磺(磺多辛)Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) Blocking Peptide氮杂环庚烷-酮盐酸盐 周效磺(标准品)Phospho-EGF Receptor (Tyr1173) Blocking Peptide2-溴-5-(三氟甲基)吡啶 乙偶姻Phospho-HER3/ErbB3 (Tyr1289) Blocking Peptide2-溴-氟-6-硝 青霉素G钠盐ATF-4 (D4B8) Rabbit mAb2,6-二氟肼盐酸盐 青霉素G钠(标准品)DEPTOR/DEPDC6 (D9F5) Rabbit mAb3,5-二三氟肼盐酸盐 米格列奈钙Phospho-GRB10 (Ser476) (D4E6) Rabbit mAbN-(2,二氯苄基) 米格列奈钙(标准品)Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) (D7D11) Rabbit mAb氟乙 基硫氧嘧啶 /6-正基-2-硫代尿嘧啶Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) (D7D11) Rabbit mAb异基 氟米龙醋酸酯TCF12/HEB (D2C10) Rabbit mAb叔丁基 十溴二FKBP4 Antibody2-噻吩磺酰 氨基杂环盐酸盐Arrestin 1/S-Arrestin Antibody(溴甲酰)酸 巴贝斯属虫通用探针法荧光PCR检测试剂盒FAM172A蛋白(FAM172A)ELISA试剂盒CRF/CRH 促肾上腺皮质激素释放因子抗体20 ul E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒CRF/CRH 促肾上腺皮质激素释放因子抗体100 ul E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒CRHR1/CRFR1 促肾上腺皮质释放激素受体1抗体20 ul E3泛素蛋白连接酶TRIM68(TRIM68)ELISA试剂盒CRHR2/CRFR2 促肾上腺皮质释放激素受体2抗体100 ul D-酸脱氢酶(D-LDH)ELISA试剂盒CSIG 细胞衰老抑制基因抗体300 ul D-酸ELISA试剂盒Cripto-1(NT) 畸胎瘤衍化生长因子抗体(N端)100 ul D-甘油3-酸ELISA试剂盒Cripto-1 畸胎瘤衍化生长因子抗体(C端)25 ul D二聚体(D2D)ELISA试剂盒CSMD1 CSMD1抗体250 ul DNA(胞嘧啶-5)甲基转移酶3B(DNMT3B)ELISA试剂盒CRTAM CRTAM抗体100 ul 实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |