客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 产品名称 | 幽门弯曲杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Campylobacter pybridis | 货号 | YSP96498 |
荧光定量PCR试剂盒技术: 产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 样品RNA的抽提: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 苊(标准品)Spry2 (D3G1A) Rabbit mAb(三氟甲基)(基)硫脲 铝标准溶液(1000μg/ml,介质:1.0 mol/L HNO3)Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)异-2,二羟-1,双二基膦丁烷 铝标准溶液(100µg/mL,基体:5%HCl)p95/NBS1 (D6J5I) Rabbit mAb乙基己基三酮 甲(标准品)HCN2 (D1C6I) Rabbit mAb苄氧基酸 邻二甲酸二丁氧基乙酯(标准品)Rpb1 NTD (D8L4Y) Rabbit mAb7-氟吲哚 三聚酸(标准品)CGRP (D5R8F) Rabbit mAb2,二甲基-氯吡啶-N-氧化物 (+/-)-儿茶精(标准品)CGRP (D5R8F) Rabbit mAb硝基肉桂 邻二甲酸二庚酯(标准品)EphB4 (D1C7N) Rabbit mAb2--氨基吡啶 反油酸(标准品)Sox2 (D1C7J) XP® Rabbit mAb甲基糠基二硫 十七碳酸(标准品)Sox2 (D1C7J) XP® Rabbit mAb氨基-溴吡啶 十七碳酸(98%)PROX1 (D2J6J) Rabbit mAb氯乙酯 隐色孔雀石绿(标准品)Phospho-CDCP1 (Tyr743) (D2G2J) Rabbit mAb6-溴-氮杂吲哚 二十酸甲酯(标准品)VPRBP (D5K5V) Rabbit mAb2-氨基-基噻吩-羧酸乙酯 蓖麻油酸甲酯(标准品)α-Smooth Muscle Actin Antibody环戊基酸 甲酸甲酯(标准品)CXCL10 (D5L5L) Rabbit mAb2,二氯酸 亚硫酸氢钠甲萘醌(标准品)IFI16 (D8B5T) Rabbit mAb氧基-叔丁基-二甲基硅烷 山嵛酸甲酯(标准品)TIM-1 (E1R9N) Rabbit mAb-2-硝 己酸甲酯(标准品)β-Amyloid (1-42 Specific) (D9A3A) Rabbit mAb一氯二氟乙酮 幽门弯曲杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒IL-13 白介素13抗体100 ul 超酸化微管相关蛋白tau(hyper phosphorylad MAPT)ELISA试剂盒IL-14/Taxilin alpha 白介素14抗体100 ul 肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒IL-15RA 白介素15受体α抗体100 ul 肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒IL-15 白介素15抗体100 ul 肠道病毒71型(EV71)抗体(IgM)ELISA试剂盒IL-16 白介素16抗体100 ul 层粘连蛋白亚基γ-2(LAMC2)ELISA试剂盒IL-13Ra1 白细胞介素-13受体a1抗体100 ul 层粘连蛋白β1(LN-β1)ELISA试剂盒IL-13Ra2 白细胞介素-13受体a2抗体100 ul 层粘连蛋白-5(LN-5)ELISA试剂盒IL-16/LCF 白介素-16抗体100 ul 层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒IL-17 (mouse, rat) 白介素-17抗体(,)20 ul 实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |