口蹄疫病毒亚型PCR检测试剂盒说明书

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建

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特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：产品仅用于科研检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
     5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
4,4'-联吡啶/γ,γ-联吡啶/4,4-联吡啶/4-联吡啶/4,4'-Bipyridine 质量规格：AR 包装;25g

2-羟基吡啶/2-吡啶酚/2-吡啶酮/2-Hydroxypyridine 质量规格：AR 包装;5g

2,4,6-*基吡啶/*基吡啶/可力丁/2,4,6-*基氮杂苯/胶氨酸/2,4,6-可力丁/TMP 质量规格：Indicator 包装;1g

4-羟基吡啶/4-吡啶酚/4-吡啶酮/4-Hydroxypyridine 质量规格：IND 包装;25g

2-苯乙醇/β-苯乙醇/苯甲原醇/2-苯基乙醇/苯乙醇/α-甲基苯基甲醇/α-甲基苄醇/β-苯基乙醇/苄基甲醇/2-Phenylethanol 质量规格：IND 包装;5g

2-苯丙醇/β-苯丙醇/β-羟基异丙苯/β-甲基苯基乙醇/β-羟基乙苯丙醇/2-Phenyl-1-propanol 质量规格：AR 包装;1g

3-苯丙醇/γ-苯丙醇/氢化肉桂醇/γ-羟基丙基苯/3-苯基丙醇/利胆醇/3-苯基-1-丙醇/3-phenylpropanol 质量规格：AR 包装;5g

异丙醇/2-丙醇/二甲基甲醇/二甲基原醇/第二丙醇/IPA 质量规格：AR 包装;100g

9-芴甲醇/芴甲醇/9-芴基甲醇/9-(羟基甲基)芴/9-Fluorenylmethanol 质量规格：>60%(HPLC) 包装;25g

苯甲醇/苄醇/苄基醇/α-羟基甲苯/α-羟甲苯/Benzyl alcohol 质量规格：IND 包装;5g

二苯基甲醇/二苯甲醇/α-苯基苯甲醇/双苯甲醇/Diphenylcarbinol 质量规格：AR 包装;1g

叔丁醇/第三丁醇/*基甲醇/2-甲基-2-丙醇/特丁醇/TBA 质量规格：AR 包装;25g

三氯叔丁醇/氯丁醇/三氯丁原醇/安钠新/克罗勒吞/1,1,1-三氯-2-甲基-2-丙醇/β,β,β-三氯叔丁醇/1,1,1-三氯叔丁醇/氯代丁醇/Chlorobutanol 质量规格：IND 包装;5g

2-乙基-1-丁醇/2-乙基丁醇/异己醇/二乙基乙醇/2-乙-1-丁醇/3-羟甲基戊烷/假己醇/2-Ethyl-1-butanol 质量规格：IND 包装;25g

肉桂醇/桂皮醇/苯醇/桂醇/3-苯基-2--1-醇/β-苯醇/Cinnamyl alcohol 质量规格：IND 包装;5g

1-壬醇/第九醇/辛基甲醇/壬醇/九碳醇/天竺葵醇/正壬醇/1-Nonanol 质量规格：IND 包装;25ml

2-壬醇/庚基甲基甲醇/甲基庚基甲醇/2-壬基醇/2-Nonanoll 质量规格：AR,90% 包装;5ml
口蹄疫病毒亚型PCR检测试剂盒说明书Weissella│viridescens 中文名称：绿色魏斯氏菌种属:Weissella│viridescens分离基物:生物样/石斑鱼/肠道内容物提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:生物活性微生物/抗菌活性微生物培养方法培养基:6生长条件:25℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：98%

Bizionia│sp. 中文名称：比齐奥氏菌种属:Bizionia│sp.分离基物:沉积物/深灰色带绿色沉积物提供形式:冻干物模式菌株:no应用领域:产酶微生物/产脂肪酶菌株（三丁酸甘油酯法） 产酶微生物/脂酶（三丁酸甘油酯）、蛋白酶、脂酶（Tween80）培养方法培养基:821生长条件:15℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：98%

Brevibacterium│antiquum 中文名称：古老短杆菌种属:Brevibacterium│antiquum分离基物:样/深海底层样提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:潜在的有机污染物降解菌/分离自原油富集菌群培养方法培养基:1001生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%

Leisingera│nanhaiensis 中文名称：南海雷*氏菌种属:Leisingera│nanhaiensis分离基物:沉积物/表层沉积物提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:yes应用领域:模式菌株:；培养方法培养基:821生长条件:25℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%

Klebsiella│pneumoniae 中文名称：肺炎克雷氏伯杆菌种属:Klebsiella│pneumoniae分离基物:样/近海海提供形式:斜面培养物模式菌株:no应用领域:生物转化微生物/分离自硫酸盐还原菌菌群培养方法培养基:471生长条件:25℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%

Flavobacterium│gelidilacus 中文名称：冰湖黄杆菌种属:Flavobacterium│gelidilacus分离基物:生物样/微生物席提供形式:冻干物模式菌株:yes应用领域:模式菌株:，用于分类学研究。培养方法培养基:471生长条件:25℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%

Enterococcus│gallinarum 中文名称：鹑鸡肠球菌种属:Enterococcus│gallinarum分离基物:样/表层海提供形式:冻干物模式菌株:no应用领域:有机污染物降解菌/降解二苯并噻吩培养方法培养基:472生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：99%

Thauera│mechernichensis 中文名称：梅谢尼希索氏菌种属:Thauera│mechernichensis分离基物:沉积物/表层沉积物提供形式:斜面培养物模式菌株:no应用领域:潜在的有机污染物降解菌/分离自苯酚降解菌群培养方法培养基:33生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：99%