PCR技术的定量原理: 扩增曲线 在Real- qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real-time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化,此时即为基线期。 PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数形式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数形式生成模板,从而进入“平台期”。在该时期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系,所以根据终的PCR产物量不能计算出初始模板量。 荧光染料的优点: 产品仅用于科研使用简便; 可以与任何PCR产物结合; 价格便宜; 荧光染料的缺点: 不能区分不同的双链DNA 引物二聚体会影响检测的敏感性 非特异性产物会影响结果的敏感性 引物二聚体和非特异性扩增问题可以通过熔解曲线 (Melting curve) 进行识别,进而通过PCR引物的设计和反应条件的优化得以解决。总的来说,SYBR Green I方法是一种基础也的Real-time qPCR实验手段。 产品名称 | 鼻疽假单胞菌探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Pseudomonas mallei | 货号 | YSP97118 |
荧光探针: Real-e qPCR中的荧光探针为TaqMan探针,其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针,该探针的5'端标记荧光基团,3'端标记淬灭基团。 正常情况下两个基团的空间距离很近,荧光基因因淬灭而不能发出荧光。PCR扩增时,引物与该探针同时结合到模板上,探针的结合位置位于上下游引物之间。 当扩增延伸到探针结合的位置时,Taq酶利用5'外切酶活性,将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来,从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比,因此,根据PCR反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。 TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题,反应结束后无需通过熔解曲线检测,缩短了实验时间。 TaqMan探针技术的优点: 荧光背景低; 敏感性高; 杂交稳定性高; 荧光光谱分辨率好; 特异性高。 TaqMan探针技术的缺点: 成本高; 设计难度大; 只能用于检测产物长度低于150bp的反应。 由于TaqMan探针的高特异性,可用于等位基因的辨别,特别适用于人类基因多态性以及根据SNP区别和定量菌株。 荧光定量PCR原理: 产品仅用于科研荧光定量PCR早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。 特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 黏病毒耐药蛋白2(MX2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% Paenibacillus thailandensis 5g 前-B-淋巴细胞基因3(VPREB3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 95% 柄篮状菌 1g Vezatin蛋白(VEZT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 95% 巨大芽孢杆菌 250mg Otubain 1蛋白(OTUB1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 解淀粉芽孢杆菌 1g Otubain 2蛋白(OTUB2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 鸡油菌 5g 肌腱蛋白M(TNM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ≥97% (HPCE) 荧光假单胞菌 250mg 肌腱蛋白M2(TENM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 蘑菇轮枝孢 100g 肌腱蛋白M3(TENM3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 大肠埃希氏菌 25g 肌腱蛋白M4(TENM4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 弗雷德里克斯堡假单胞菌 100mg Nicalin蛋白(NCLN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 栖稻假单胞菌 500mg N-去酰化酶/磺基转移酶1(NDST1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) >95.0%(HPLC) 白僵菌 1g N-去酰化酶/磺基转移酶2(NDST2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) >95.0%(HPLC) 好食脉孢菌 5g N-去酰化酶/磺基转移酶3(NDST3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 厚垣普奇尼亚菌* 100mg 信号素3D(SEMA3D)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 卷枝毛霉原变型 500mg 信号素3B(SEMA3B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 95% 谷氨酸棒杆菌 1g 信号素4C(SEMA4C)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 95% 黄柄曲霉 25g 信号素4F(SEMA4F)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 95% 根瘤菌 5g 信号素5A(SEMA5A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 96% 运动节杆菌 100g 鼻疽假单胞菌探针法荧光PCR检测试剂盒DNA聚合酶ι/DNA pol ι抗体AU1 tag peptide AU1 tag标签多肽1 Kit DNA聚合酶κ/DNA pol κ抗体Glu-Glu Tag peptide Glu-Glu Tag多肽蛋白100µg DNA聚合酶λ/DNA pol λ抗体CNGA2(Cyclic Nucleotide Gad Cation Alpha 2) 环核苷酸阳离子通道蛋白α2抗原1 Kit DNA聚合酶μ/DNA pol μ抗体CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesrase) C型钠尿肽抗原1 Kit 细胞周期蛋白3抗体CNTF(Ciliary Neurotrophic Factor) 睫状神经营养因子抗原1 Kit DNAJC9蛋白抗体factor V(Vcoagulation factor) 凝血因子5抗体1 Kit DNA甲基转移酶2抗体Collagen III (Collagen Type III ) 抗Ⅲ型胶原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型胶原)1 Kit DNA甲基转移酶3L抗体Collagen III (-Collagen Type III ) Ⅲ型胶原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型胶原)1 Kit 二肽基肽酶10抗体Collagen IV (Collagen Type IV ) IV型胶原抗体(Collagen Ⅳ Ⅳ 型胶原)1 Kit |