荧光染料的优点: 产品仅用于科研使用简便; 可以与任何PCR产物结合; 价格便宜; 荧光染料的缺点: 不能区分不同的双链DNA 引物二聚体会影响检测的敏感性 非特异性产物会影响结果的敏感性 引物二聚体和非特异性扩增问题可以通过熔解曲线 (Melting curve) 进行识别,进而通过PCR引物的设计和反应条件的优化得以解决。总的来说,SYBR Green I方法是一种基础也的Real-time qPCR实验手段。 特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 产品名称 | 肺炎支原体探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Mycoplasma pneumoniae | 货号 | YSP96986 |
荧光探针: Real-e qPCR中的荧光探针为TaqMan探针,其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针,该探针的5'端标记荧光基团,3'端标记淬灭基团。 正常情况下两个基团的空间距离很近,荧光基因因淬灭而不能发出荧光。PCR扩增时,引物与该探针同时结合到模板上,探针的结合位置位于上下游引物之间。 当扩增延伸到探针结合的位置时,Taq酶利用5'外切酶活性,将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来,从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比,因此,根据PCR反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。 TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题,反应结束后无需通过熔解曲线检测,缩短了实验时间。 TaqMan探针技术的优点: 荧光背景低; 敏感性高; 杂交稳定性高; 荧光光谱分辨率好; 特异性高。 TaqMan探针技术的缺点: 成本高; 设计难度大; 只能用于检测产物长度低于150bp的反应。 由于TaqMan探针的高特异性,可用于等位基因的辨别,特别适用于人类基因多态性以及根据SNP区别和定量菌株。 荧光定量PCR原理: 产品仅用于科研荧光定量PCR早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。 Apelin 英文名称: 脂肪炎症因子Apelin抗体 0.1ml Anti-Tenascin C/Tn-C 细胞粘合素(固生蛋白)抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml (EGFR)ELISA Kit 大鼠表皮生长因子受体Multi-class antibodies规格: 48T Anti-SUMO 1 类泛素蛋白抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的羊抗豚鼠IgG 规格 0.1ml BRCA-2(Human breast cancer susceptibility protein 2) ELISA Kit 人癌易感蛋白2 96T NDUFS7 英文名称: 线粒体复合物NDUFS7蛋白抗体 0.2ml C14ORF140 英文名称: 14号染色体开放阅读框140抗体 0.2ml Anti-IL-33/NFHEV 白介素33抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml EGF(Human Epidermal growth factor) ELISA Kit 人表皮生长因子Multi-class antibodies规格: 48T Anti-CSF3 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子3抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/PE PE标记的小鼠抗豚鼠IgG 规格 0.1ml ANG-1(Human Angiopoietin 1) ELISA Kit 人血管生成素1 96T phospho-c-Raf(Ser338) 英文名称: 酸化原癌基因c-Raf抗体 0.1ml α乳清蛋白 单克隆抗体alpha Lactalbumin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul EF手性域家族成员D1 单克隆抗体EFHD1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul X射线修复交叉互补蛋白4 单克隆抗体XRCC4 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 组蛋白H3 (Di Methyl Lys79) 单克隆抗体(Q7)Histone H3 (Di Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(Q7)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 子受体(LIFR)ELISA试剂盒英文名称:Rat leukemia inhibitory factor receptor,LIFR ELISA Kit * 大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒英文名称:Rat Cystatin C,Cys-C ELISA Kit* 大鼠胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA试剂盒英文名称:Rat Cytosolic Phospholipase A2,cPLA2 ELISA Kit* 人基因组DNA,女性Human Genomic DNA4℃保存100μg 人基因组DNA,男性Human Genomic DNA4℃保存100μg 人核糖核酸酶P基因PCR测定试剂盒低温运输,-20℃保存50T 人肥胖易感基因825T PCR测定试剂盒低温运输,-20℃保存50T 人单核细胞分离液1.075Cell Separation Solution-20℃保存200 mL 人雌激素受体基因PCR检测试剂盒低温运输,-20℃保存50T 人博卡病毒PCR检测试剂盒低温组蛋白H3 (Tri Methyl Lys36) 单克隆抗体(Q12)Histone H3 (Tri Methyl Lys36) Monoclonal Antibody(Q12)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul Oct1 单克隆抗体Oct1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 肺炎支原体探针法荧光PCR检测试剂盒蛋白酸激酶PKC/CPI-17抗体CD72/Ly-32/FITC 荧光素标记CD72抗体IgG100 ul 酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体CD74(MHC II )/FITC 荧光素标记CD74抗体IgG100 ul 酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体TGF- Alpha /FITC 荧光素标记转移生长因子–α抗体IgG100 ul 胰辅脂酶抗体TGF- Beta1/FITC 荧光素标记TGF-β1抗体IgG(标记抗体)100 ul 19号染色体开放阅读框45抗体TGF- Beta2 /FITC 荧光素标记转移生长因子–β2抗体IgG100 ul 过氧化氢诱导转录蛋白1抗体TGF- Beta3/FITC 荧光素标记转移生长因子–β3抗体IgG100 ul 核因子NFκB激活蛋白1抗体TGF- BetaR1/ALK /FITC 荧光素标记转移生长因子–β受体1抗体IgG100 ul 第12号染色体开放阅读框23抗体TGF- BetaR 2/FITC 荧光素标记转移生长因子–β受体2抗体IgG100 ul γ-连环素/连接蛋白γ抗体TGF- BetaR 3/FITC 荧光素标记转移生长因子–β受体3抗体IgG100 ul PCR技术的定量原理: 扩增曲线 在Real- qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real-time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化,此时即为基线期。 PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数形式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数形式生成模板,从而进入“平台期”。在该时期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系,所以根据终的PCR产物量不能计算出初始模板量。 |