客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。 产品名称 | 坏死梭杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Fusobacterium necrophorum | 货号 | YSP96745 |
荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
千金子二萜二乙酰甲酰酯（标准品）（二巯基亚甲基）-2-甲基-6-（对二甲氨基乙基）-4H-吡喃 羌活（标准品）2-甲基 10-羟基癸酸（标准品)三(二亚苄基酮)二钯 羟基红花黄色素A(标准品)羟基-2-丁酮 马兜铃酸A去甲基代谢产物甲氧基盐酸盐 羟基积雪草苷（标准品）2-溴-6-氯吡啶 羟基积雪草酸（标准品）溴-2-氟甲 羟基积雪草酸5-溴-2-氟甲 海柯皂苷元3,二氯甲酸 灵芝酸 B2(1H)-PYRIDINONE,5-CHLORO-FLUORO-(9CI) 去甲劳丹盐酸盐,四氢盐酸盐西米替汀 异夏佛塔苷1-苄基-5-氧-吡咯烷羧酸甲酯 氨甲酰甲胆；氯贝胆2-氨基-6-羟基吡啶 5-羟甲基糠（标准品）2-苄 茄尼（标准品）甲基二酸 大波斯菊苷,芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(标准品)氯-甲酸 秦皮苷（标准品）DL-对氟氨酸 秦皮甲素（标准品）乙二-1,1-二甲基乙缩溶液
坏死梭杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒ADP核糖基化样因子8B抗体CEA /FITC 荧光素标记癌胚抗原抗体IgG100 ul 三酸腺苷酶家族蛋白2抗体CEBP- Alpha /CLEBP Alpha /FITC 荧光素标记转录调节因子C/EBP α 抗体IgG100 ul AKIRIN1蛋白抗体Phospho-C/EBPbeta (Ser105) /FITC 荧光素标记兔抗、大、转录调节因子C/EBP β抗体IgG100 ul 锚定蛋白样蛋白1抗体Phospho-C/EBPalpha (Ser21) /FITC 荧光素标记兔抗、大、转录调节因子C/EBP α 抗体IgG100 ul 腺苷酸激酶2抗体Phospho-C/EBPalpha (Thr222/226) /FITC 荧光素标记兔抗、大、转录调节因子C/EBP α 抗体IgG20 ul 顶体前体蛋白抗体C/EBP Beta/FITC 荧光素标记转录调节因子C/EBP β抗体IgG100 ul 黑色素瘤缺失样蛋白1抗体Phospho-C/EBPbeta (Thr235) /FITC 荧光素标记兔抗、大、转录调节因子C/EBP β抗体IgG100µl 未知糖基化转移酶AER61抗体PBK/TOPK/FITC 荧光素标记PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶抗体IgG100µl 铁蛋白Fe65抗体Phospho-PBK/TOPK (Thr9) /FITC 荧光素标记酸化PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶抗体IgG500µl
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |
