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黑色普雷沃菌探针法荧光PCR检测试剂盒

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更新日期:
2020-12-03
点击次数:
182
产品特点:
黑色普雷沃菌探针法荧光PCR检测试剂盒注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
  50次黑色普雷沃菌探针法荧光PCR检测试剂盒的详细资料:

客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。

 产品名称

黑色普雷沃菌探针法荧光PCR检测试剂盒

 英文名称

 

 货号

 YSP97099

荧光定量PCR试剂盒制造技术:
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1)紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
弹性蛋白微原纤维界面因子2(EMILIN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 20 wt. % suspension in THF 金灰青霉 25g

白介素12受体β2(IL2Rβ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 2.0 M in heptane/THF/ethylbenzene 裂褐层孔菌 100ml

组胺H3受体(HRH3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 2.0 M in heptane/THF/ethylbenzene 茯苓 500ml

角蛋白81(KRT81)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 闪光须霉 1g

分泌球蛋白家族2A成员2(SCGB2A2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 米曲霉 250mg

肌球蛋白轻链9(MYL9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 谷氨酸棒杆菌 1g

半胱氨酸丰富跨膜BMP调节因子1(CRIM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 香草兰根疾 5g

几丁质酶3样蛋白2(CHI3L2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 90% 鞘氨醇单胞菌属 1g

视黄醇结合蛋白3(RBP3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 90% 葡萄座腔菌 25g

CD226分子(CD226)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 90% 苏云金芽胞杆菌库尔斯塔克亚种 5g

兰尼定受体1(RYR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% Marivirga tractuosa 25g

甲状腺激素反应基因(THRSP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 蜡状芽孢杆菌 5g

癌胚抗原相关细胞粘附分子8(CEACAM8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 食树脂新鞘氨醇菌 1g

肌球蛋白重链8(MYH8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ≥97% 光孢黄丛枝珊瑚菌 25g

尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ≥97% 约利曼漆斑菌 5g

神经源素3(NEUROG3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 金黄色葡萄球菌金黄亚种 1mg

无翅型MMTV整合位点家族成员3A(WNT3A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% Pseudarthrobacter 1g

10kDa干扰素γ诱导蛋白(IP10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 枯草芽孢杆菌 25g
黑色普雷沃菌探针法荧光PCR检测试剂盒碳水化合物磺基转移酶2抗体PP-1  蛋白酸酯酶-1(抗原)100 ul

碳水化合物磺基转移酶3抗体BMPR-1A(Bone Morphogenetic proin Receptor-1A)  骨成型蛋白受体1A抗原100 ul

碳水化合物磺基转移酶5抗体PPAR-delta (peroxisome proliferator-activad receptor)  D型-过氧化酶活化增生受体(多肽)100 ul

碳水化合物磺基转移酶6抗体PP-2A (proin phosphatase 2A)  蛋白质酸酶-2A(抗原)20 ul

染色质修饰蛋白CHMP7抗体BOb-1(B-cell oct-binding proin 1)  B细胞特异性转录因子抗原5 ml

软骨凝集蛋白CHODL抗体PP-2B alpha 1   蛋白酸酯酶-2B 催化亚单位(抗原)100µl

胆囊收缩素39抗体PR (Progestogerone receptor)  孕激素受体(抗原)100 ul

激酶α抗体PS-1(NT),Presennillin-1(S182)  早老素蛋白-1(抗原)500 ul

阳离子通道相关蛋白4抗体PS-1,Presennillin-1(CT)  早老素蛋白-1(S182)500 ul
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μ
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。

 

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