荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。 产品名称 | 线颈*线虫探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Nematodirus filicollis | 货号 | YSP96999 |
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
phospho-beta 2 Adrenergic Receptor (Ser355 + Ser356) 英文名称： 酸化能受体β2/β2-AR抗体 0.1ml Anti-CBX3/FITC 荧光素标记染色盒同源物3抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml 6-keto-PGF1a(Mouse 6-keto-prostaglandin F1a) ELISA Kit 小鼠6酮前列腺素F1aMulti-class antibodies规格： 48T Anti-CCL3/MIP-1 Alpha/FITC 荧光素标记巨噬细胞炎性蛋白1α抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml Rhesus antibody Rh EGF 小鼠抗表皮生长因子抗体 规格 0.1ml LZM (Rabbit Lysozyme) ELISA Kit 兔溶菌酶 96T MRCK alpha 英文名称： CDC42结合蛋白激酶α抗体(MRCKα) 0.2ml C17orf64 英文名称： 17号染色体开放阅读框64抗体 0.2ml Anti-OPN 骨桥蛋白抗体(分泌型蛋白1)Multi-class antibodies规格： 0.1ml MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1) ELISA kit 人基质金属蛋白酶1Multi-class antibodies规格： 48T 名称：Human Peptide γ,Pγ ELISA Kit进口/原装
人ω干扰素(IFN-ω/IFNB)ELISA试剂盒英文名称：Human Interferon ω,IFN-ω ELISA Kit进口/原装
犬瘟热病毒PCR检测试剂盒低温运输，-20℃保存50T
犬钩端螺旋体PCR检测试剂盒低温运输，-20℃保存50T
犬布氏杆菌PCR检测试剂盒低温运输，-20℃保存50T
醛缩酶测试盒Oxidative Stress Detection Kit常温保存24 T
醛缩酶Aldolase 4℃保存100mg
醛基磁珠Magnetic beads,Aldehydic 4℃密闭、竖直保存2mL
去离子甲酰胺Deionized Formamide4℃保存100mL
去垢剂去除树脂Detergent Erasol Resin常温保存10mL
曲拉通 X-114TritonAnti-Orexin-A 增食欲素-A/欲激素AMulti-class antibodies规格： 0.1ml Rhesus antibody Rh ICAM-3/CD50 细胞间粘附分子-3抗体 规格 0.1ml Cortisol(Mouse Cortisol)ELISA Kit 小鼠皮质醇 96T PCDH18 英文名称： 原钙粘附蛋白18抗体 0.2ml 酸化酪氨酸 单克隆抗体Phosphotyrosine Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 肿瘤坏死因子α 单克隆抗体TNF α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 肿瘤坏死因子α 单克隆抗体TNF α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul P53 (Mono Methyl Lys370) 单克隆抗体P53 (Mono Methyl Lys370) Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 信号转导因子和转录激活因子3 单克隆抗体STAT3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 脂酰肌醇3激酶P85α 单克隆抗体PI3 Kinase P85α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul
线颈*线虫探针法荧光PCR检测试剂盒CSMD2蛋白抗体TSLP/FITC 荧光素标记淋巴细胞生成素-1抗体IgG100 ul CSMD3蛋白抗体TSLPR/CRLF2/FITC 荧光素标记兔抗、大、胸腺基质淋巴细胞生成素受体抗体IgG100 ul 钙调神经酸酶CSTP1抗体TSP-1/THBS1/FITC 荧光素标记血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1抗体IgG100 ul CTAGE6蛋白抗体TTF-1/FITC 荧光素标记甲状腺核转录因子-1/甲状腺特异增强子结合蛋白抗体IgG500 ul 皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原4抗体TTF-2/FITC 荧光素标记甲状腺转录因子-2抗体IgG100 ul 膜蛋白CLDND2抗体Tubb3/FITC 荧光素标记β微管蛋白-Ⅲ抗体IgG20 ul 含半胱氨酸和组氨酸丰富域蛋白1抗体Tubulin- Alpha/FITC 荧光素标记微管蛋白α抗体IgG100 ul 猪圆环病毒Ⅱ型衣壳蛋白Tubulin- Beta/FITC 荧光素标记微管蛋白抗体IgG100 ul 抗菌肽CAMP抗体Tubulin- Beta/FITC 荧光素标记微管蛋白抗体IgG100 ul |
