样品RNA的抽提：
①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 产品名称 | 猪痢疾短螺旋体探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Brachyspira hyodisenteriae | 货号 | YSP96471 |
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 荧光定量PCR试剂盒技术：
本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
马来酸二甲酯(>98%，BR)Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-甲酸乙酯吡啶 草酸二甲酯(>98%，BR)Cell Health Assay Kit5-溴-甲基-1H-吲唑 丁二酸二甲酯(>99%,BR)IL-17A (D1X7L) Rabbit mAb (Mouse Specific)氨基-甲酸甲酯 二甲酮钠盐(>97%,BR)SimpleChIP® Human FDPS Promor Primers2-乙 N,N-二异基乙(>98%，BR)Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)甲酸甲酯甲酯 二烷(>98%，BR)p130 Cas (E1L9H) Rabbit mAb2 2'-联嘧啶 二甲(>98% (HPLC),BR)DNA Polymerase η (E1I7T) Rabbit mAb氯-氟 直接蓝71(≥50%,BR)Phospho-ATF-2 (Thr71) (11G2) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-氨基-6-氯-酚 天狼猩红UNC5B (D9M7Z) Rabbit mAb2-溴-4,5-二甲氧基甲酸 DL-2氨基丁酸(>98.5%,BR)PGRMC1 (D6M5M) XP® Rabbit mAb2-咪唑烷酮 DL-2-哌啶羧酸(>98%，BR)PGRMC1 (D6M5M) XP® Rabbit mAb乙二四乙酸锌钠盐 DL-甘氨酸(>98%，BC)Phospho-PI3 Kinase Class III (Ser249) Antibody溴-5-硝基-2-羟基吡啶 DL-beta-氨酸(>98%，BR)Cellular Glutathione Dection Assay Kit1-(甲氧基-(甲氧基氧基)基)-甲基-1-丁酮 DL-肉盐酸盐LARS Antibody2,5-二溴对二甲酸二乙酯 DL-鸟氨酸盐酸盐(>98%，BC)c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)氯-2-(2-氯-5-氨基-氧基)-5-三氟甲基吡啶 DL-(>99%,BP)Phospho-SSH3 (Ser37) Antibody2-溴-5-甲 甲基酸二甲氨乙酯(>99%,BR)VAMP7 (D8Y1R) Rabbit mAb (IF Specific)2-酸环己基酯 D-苹果酸(>98%，BR)Rheb (E1G1R) Rabbit mAb3,5-双(三氟甲基)基异硫酯
猪痢疾短螺旋体探针法荧光PCR检测试剂盒钙依赖性胞浆型脂酶A2(iPLA2)ELISA试剂盒Hemagglutinin (H2N2) 流感病毒血凝素抗体（H2N2）1 Kit 钙卫蛋白ELISA试剂盒Histone H2A 组蛋白H2AX抗体300 ul 钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒Phospho-Histone H2A.X (Ser139) 酸化组蛋白H2AX抗体100 ul 钙联蛋白(calnexin)ELISA试剂盒Histone H2B 组蛋白H2B抗体100 ul 钙离子通道抗体(IgG)ELISA试剂盒Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病毒血凝素抗体100 ul 钙结合蛋白S100A14 ELISA试剂盒Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病毒血凝素抗体100 ul 钙结合蛋白S100A13 ELISA试剂盒Haase 透明质酸酶/玻璃酸酶抗体100 ul 钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒HADHSC (human) 短链L-3羟烷基辅酶A脱氢酶抗体（）100 ul 钙激活中性蛋白酶6(CAPN6)ELISA试剂盒HADHSC (rat, mouse) 短链L-3羟烷基辅酶A脱氢酶抗体（，）100 ul |
