样品RNA的抽提: ①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 产品名称 | 微黄*线虫探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Nematodirus helvetianus | 货号 | YSP97000 |
实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 荧光定量PCR试剂盒技术: 本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 AIP1 英文名称: 激活素受体相互作用蛋白1抗体 0.2ml Anti-CD158b2/KIR2DL3/NKAT2a/FITC 荧光素标记NK细胞抑制性受体2DL3抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml Mouse Mucin-7,MUC7 ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘液素7Multi-class antibodies规格: 48T Anti-BRCA1(mouse rat)/FITC 荧光素标记癌易感基因1抗体(小鼠 大鼠)IgGMulti-class antibodies规格: 0.2mlKit进口/分装 人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒英文名称:Human interferon-inducible protein 16,IFI16/p16 ELISA Kit* 人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA试剂盒英文名称:Humanγ-glutamyl systeine synthetase,γ-ECS ELISA Kit* 人γ谷氨酰转移酶(G) ELISA试剂盒英文名称:Human gamma glutamyl transpeptidase,GG ELISA Kit进口/原装 人γ肽(Pγ)ELISA试剂盒英文 X-114室温保存100mL 曲拉通 X-100Triton X-100室温保存100mL 隐丹参酮Cryptotanshinone35825-57-120mgHPLC≥98% 隐绿原酸;4-咖啡酰奎宁酸Cryptochlorogenic acid905-99-720mgHPLC≥98% 印乌碱Indiaconitine20mgHPLC≥98% 樱黄素;李属异黄酮;李属异黄酮;5,4'-二羟基-7-甲氧基异黄酮Prunetin552-59-020mgHPLC≥98% 鹰嘴豆芽素A;鸡豆黄素A,生原禅宁A,5,7-二羟基-4’-甲氧基异黄酮;拜查林Biochanin A491-80-520mgHPLC≥98% 硬飞燕草碱Belsoline509-18-220mgHPLC≥98% 右旋四氢巴马汀d-Tetrahydropalmatine3520-14- Rhesus antibody Rh EphA5/Eph receptor A5 酪氨酸蛋白激酶A5受体抗体 规格 0.1ml Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2 ELISA Kit 小鼠Qa淋巴细胞抗原2 96T MRG15 英文名称: 转录调控因子MRG15抗体 0.2ml C17orf66 英文名称: 17号染色体开放阅读框66抗体 0.2ml Anti-OPN 骨桥蛋白抗体(分泌型蛋白1)人Multi-class antibodies规格: 0.1ml anti-CMV IgM(Human anti-cytomegalovirus IgM antibody) ELISA Kit 人抗巨细胞病毒抗体IgMMulti-class antibodies规格: 48T Anti-PP2Ac 酸酯酶-2Ac抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Hepatic lipase 肝脂酶抗体 规格 0.2ml P III NP(Human N-terminal procollagen III propeptide) ELISA Kit 人Ⅲ型前胶原肽 96T PCDH7 英文名称: 原钙粘蛋白7抗体 0.2ml 脂酰肌醇3激酶P85α 单克隆抗体PI3 Kinase P85α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 葡萄糖调节蛋白78 单克隆抗体GRP78/Bip Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 信号传导蛋白SMAD3 单克隆抗体Smad3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 信号转导因子和转录激活因子3 单克隆抗体STAT3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 葡萄糖调节蛋白78 单克隆抗体GRP78/Bip Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 核酮糖-1,5-二酸羧化酶/加氧酶 (Large Chain) 单克隆抗体Rubisco (Large Chain) Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 微黄*线虫探针法荧光PCR检测试剂盒卷曲螺旋结构域蛋白134抗体Tubulin- Gamma/FITC 荧光素标记微管蛋白-γ抗体IgG100 ul 卷曲螺旋结构域蛋白69抗体 Beta-Actin/HRP 辣根过氧化物酶标记β-肌动蛋白(抗体)1 Kit 卷曲螺旋结构域蛋白98抗体Tuberin/TSC2/FITC 荧光素标记马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体IgG1 Kit 卷曲螺旋结构域蛋白70抗体Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr320) /FITC 荧光素标记酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体IgG1 Kit 卷曲螺旋结构域蛋白51抗体Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387)/FITC 荧光素标记酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体IgG1 Kit 卷曲螺旋结构域蛋白125抗体Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) /FITC 荧光素标记酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体IgG100 ul 卷曲螺旋结构域蛋白50抗体Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr1571)/FITC 荧光素标记酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体IgG1 Kit 卷曲螺旋结构域蛋白90A抗体Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462)/FITC 荧光素标记酸化马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体IgG1 Kit 卷曲螺旋结构域蛋白71抗体VTG/HRP 辣根过氧化物酶标记兔抗鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原抗体IgG100 ul |