新生隐球菌PCR检测试剂盒说明书

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建

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特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：产品仅用于科研检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
     5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
Fmoc-L-羟脯氨酸/N-芴甲氧羰基-L-羟脯氨酸/FMOC-L-4-羟基脯氨酸/N-FMOC-顺式-4-羟基-D-脯氨酸/(2S,4R)-1-芴甲氧羰基-4-羟基吡咯烷-2-羧酸/Fmoc-Hyp-OH 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;500mg

FMOC-L-苏氨酸/N-芴甲氧羰基-L-苏氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-L-苏氨酸/Fmoc-Thr-OH 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;1g

FMOC-L-色氨酸/N-芴甲氧羰基-L-色氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-L-色氨酸/Fmoc-Trp-OH 质量规格：95%,标准品,大豆来源 包装;25g

FMOC-D-色氨酸/N-芴甲氧羰基-D-色氨酸/N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-D-色氨酸/Fmoc-D-Trp-OH 质量规格：>90 %,GC 包装;5g

FMOC-D-缬氨酸/芴甲氧羰基-D-缬氨酸/Fmoc-D-Val-OH 质量规格：>90%,GC 包装;100mg

对氯苯甘氨酸/DL-对氯苯甘氨酸/DL-2-(4-)甘氨酸/DL-α-氨基-4-氯-/PCPG 质量规格：>98%,BR 包装;25mg

DL-邻氯苯甘氨酸/DL-2-氯苯甘氨酸/DL-邻氯-α-氨基/混旋邻氯苯甘氨酸/DL-2-(2-Chlorophenyl)glycine 质量规格：HPLC≥98%,标准品 包装;25g

L-邻氯苯甘氨酸/(S)-2-氯苯甘氨酸/L-(+)-邻氯苯甘氨酸/S-(+)-邻氯苯甘氨酸/L(-)-邻氯苯甘氨酸/右旋邻氯苯甘氨酸/L-(+)-2-甘氨酸/(S)-α-氨基-(2-)乙酸/L-(+)-2-Chlorophenylglycine 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;5g

氯甲酸苄酯/氯甲酸苯甲基酯/苯甲氧基/苯甲氧羰酰氯/苄基氯/苄酯基氯/甲酸氯苄酯/苯甲氧基甲酰氯/苄氧羰酰氯/CBZ-CL 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;25g

N-苯甲酰-L-缬氨酰甘氨酰-L-精氨酸对硝基盐酸盐/N-BZ-Val-Gly-Arg PNA•HC1 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;5g

D-缬氨酰-L-白氨酰-L-赖氨酸对硝基/D-缬氨酰-L-亮氨酰-L-赖氨酰对硝基/D-Val-Leu-Lys PNA•2HC1 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;1g

Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰对硝基醋酸盐/Z-甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰对硝基乙酸盐/Z-Gly-Pro-Arg PNA acetate salt 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;25g

肌氨酸钠/N-甲基氨基乙酸钠/N-甲基甘氨酸单钠盐/N-甲基甘氨酸钠/sodium Sarcosine 质量规格：AR,>98% 包装;5g

L-天门冬氨酸钙/L-天冬氨酸钙/生力钙/L-Aspartic acid calcium salt 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;250mg

L-谷氨酸-5-甲酯/L-谷氨酸γ-甲酯/L-γ-谷氨酸甲酯/L-2-氨基戊二酸-5-甲酯/L-Glutamic acid 5-methyl ester 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;1g

N-苄基甘氨酸乙酯/N-Benzylglycine ethyl ester 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;5g

L-叔亮氨酸/L-2-氨基-3，3-二甲基丁酸/L-tert-Leucine 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;1g
新生隐球菌PCR检测试剂盒说明书Armillariella│mellea 中文名称：密环菌种属:Armillariella│mellea提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:14生长条件:25℃ 纯度：98%

Thermoanaerobacter│siderophilus 中文名称：嗜金属热厌氧杆菌（00开头的农业均无法提供）种属:Thermoanaerobacter│siderophilus分离基物:油田采出提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:产甲烷培养方法培养基:482生长条件:65℃存储条件:定期移植法 纯度：98%

Paenibacillus│peoriae 中文名称：皮尔瑞俄类芽孢杆菌种属:Paenibacillus│peoriae分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物模式菌株:no培养方法培养基:33生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：98%

Paenibacillus│pabuli 中文名称：饲料类芽胞杆菌种属:Paenibacillus│pabuli分离基物:石油污染土提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:纤维素降解菌培养方法培养基:2生长条件:30℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；定期移植法 纯度：99%

Virgibacillus│picturae 中文名称：壁画枝芽胞杆菌种属:Virgibacillus│picturae分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:33生长条件:20-30℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：99%

Rhodococcus│gordoniae 中文名称：戈氏红球菌种属:Rhodococcus│gordoniae分离基物:土壤提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:在无机盐培养基:中以100mg/L的苯酚为碳源培养，24h内对100mg/L的苯酚降解率99%培养方法培养基:2生长条件:28℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；定期移植法 纯度：99%

Sphingosinicella│microcystinivorans 中文名称：食微囊藻素鞘氨醇胞菌种属:Sphingosinicella│microcystinivorans分离基物:土壤提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:在无机盐培养基:中添加1%LB情况下，3d对20ppm降解率46.5%；对100p和降解率20-25%，降解过程中有红色中间代谢产物产生。适生长温度为28℃。培养方法培养基:2生长条件:28℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；定期移植法 纯度：≥99%

Myroides│sp. 中文名称：香味菌种属:Myroides│sp.分离基物:土壤提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:在无机盐培养基:中添加100mg/L的N-甲基，降解率达31%。培养方法培养基:33生长条件:30℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；定期移植法 纯度：98%