客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 产品名称 | 杆状巴尔通体探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Bartonella bacilliformis | 货号 | YSP96425 |
荧光定量PCR试剂盒技术: 产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 样品RNA的抽提: ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 1-氨基海因盐酸盐;AHD,1-氨基乙内酰脲盐酸盐G6PD (D5D2) Rabbit mAb1,二溴代萘 1-氨基海因盐酸盐(标准品)TH1L (D5G6W) Rabbit mAb2,2-双(氨基-羟基基)六氟烷 人促肾上腺皮质激素(1-24),替可克肽PTMScan® Phospho-ATM/ATR Substra Motif [pSQ] Kit2-正丁基-氯-5-甲酰基咪唑 缓激肽Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) Rabbit mAb (PE Conjuga)异丁基酸 舒缓激肽三醋酸盐Synaptophysin (7H12) Mouse mAb2-氯-5-氟甲 α-促黑激素,黑素皮质素β1-Adrenergic Receptor Antibody2,5-二氟吡啶 内皮素-1,人,猪MAG (D10H1) Rabbit mAb2-氯-氟-5-酚 蛙皮素,胃泌素Toll-like Receptor 2 (D7G9Z) Rabbit mAb2-乙基蒽醌 血管活性肠肽Toll-like Receptor 2 (D7G9Z) Rabbit mAb氨基-3,5-二溴吡啶 焦碳酸二乙酯Phospho-MKK3 (Ser189)/MKK6 (Ser207) (D8E9) Rabbit mAb氨基-N-甲酰 DEPC;焦碳酸二乙酯(sigma)SimpleChIP® Human EP300 Promor Primers对羟基戊酮 琼脂糖(Biowest,电泳级);西班牙琼脂糖Cox2 (D5H5) XP® Rabbit mAb甲氨基乙盐酸盐 酰(超纯)Cox2 (D5H5) XP® Rabbit mAb氟乙炔 聚乙二400CARD9 Antibody (Mouse Preferred)2-氯-三氟酸 消胆树脂;考来LAMTOR4/C7orf59 (D6A4V) Rabbit mAb1,5-萘啶 蔗糖Topoisomerase IIα (D10G9) XP® Rabbit mAb1-Boc-氮杂环丁烷 D-海藻糖二水Topoisomerase IIα (D10G9) XP® Rabbit mAb5-氨基-6-氯-2-酚 Protor-2 (D19A5) Rabbit mAb2-甲基蒽醌 杆状巴尔通体探针法荧光PCR检测试剂盒兔p53(p53)ELISA试剂盒DLX4 DLX4抗体100 ul 兔N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒DKK1 抑癌蛋白DKK1抗体100 ul 兔NADPH氧化酶1()ELISA试剂盒DKK3 抑癌蛋白DKK3抗体300 ul 兔C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒DMT1 金属离子转运体1抗体300 ul 兔CD8分子(CD8)ELISA试剂盒DMBT1 抑癌基因抗体100 ul 兔CD4分子(CD4)ELISA试剂盒Dnmt1 Dnmt1蛋白抗体100 ul 兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒Dnmt3a DNA甲基转移酶-3α抗体1 Kit 兔ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)ELISA试剂盒Dnmt3 Beta DNA甲基转移酶-3β抗体100 ul 兔8-异构(8-epi-PGF2α)ELISA试剂盒DNA PKcs DNA依赖蛋白激酶催化亚基抗体100 ul 实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |