古柏线虫通用探针法荧光PCR检测试剂盒

客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
基二甲基氯硅烷(>96.0%(GC))PI3 Kinase p110β (C33D4) Rabbit mAb氨基异恶唑

1,二基四甲基二硅氮烷(>95.0%(GC))TBK1/NAK Antibody2-溴-三氟甲基吡啶

二氯二乙基硅烷(>90.0%(GC))Insulin (C27C9) Rabbit mAb2-甲氧基-5-三氟甲基吡啶

五氟基二甲基氯硅烷(>95.0%(GC))Insulin Receptor Substra Antibody Sampler Kit溴-2-(三氟甲氧基)

五氟二甲硅基二乙(>98.0%(GC)(T))NF-κB2 p100/p52 (18D10) Rabbit mAb溴-2-三氟甲氧基-1-磺酰氯

N,N-二甲酰二乙基缩(>95.0%(GC))NF-κB2 p100/p52 (18D10) Rabbit mAb氨基-(三氟甲氧基)甲酸

N,N-二甲酰二缩(>90.0%(T))SimpleChIP® Mouse Sox2 Exon1 Primers2-基噻吩-酸

N,N-二甲酰二丁缩(>98.0%(GC)(T))IGF-I Receptor β (111A9) Rabbit mAb2-(三氟甲氧基)酸

N,N-二甲酰-二叔丁缩(>98.0%(N))Met Signaling Antibody Sampler Kit2-溴-1-(2-吡啶基)-1-乙酮

N,N-二甲酰二甲缩(0.5mL×10)Insulin Receptor β (L55B10) Mouse mAb氨基-5,6-二甲基-偏三

N,N-二甲酰二新戊基乙缩(>95.0%(GC))Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1131)/Insulin Receptor β (Tyr1146) Antibody2-氧基乙

N,N-二甲酰二甲基缩(>98.0%(GC))Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1131)/Insulin Receptor β (Tyr1146) Antibody二氧化硫脲

1-苄基-对甲基三氮(>98.0%(T))Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1131)/Insulin Receptor β (Tyr1146) AntibodyL-2,二氨基丁酸盐

1-甲基-对甲三氮(>98.0%(HPLC)(T))Ezh2 (D2C9) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)L-缬氨酸乙酯盐酸盐

基*基氢氧化铵(20-25%的甲溶液)Nicastrin (D4F6N) Rabbit mAbD-甘氨酸乙酯盐酸盐

四甲基氢氧化铵(10%的甲溶液)Phospho-Insulin Receptor β (Tyr1361) (84B2) Rabbit mAb3,二氨基甲

氢氧化*锍(0.2mol/L的甲溶液)Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor β (Tyr1150/1151) (19H7) Rabbit mAb5-氯靛红

三氯化-甲试剂(5-10%)(1mL×10)Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor β (Tyr1150/1151) (19H7) Rabbit mAb3,4,5-三溴吡唑
古柏线虫通用探针法荧光PCR检测试剂盒猫甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒PAR-2  蛋白酶激活受体-2抗体100 ul

猫黄体生成素(LH)ELISA试剂盒PAR4  蛋白酶活化受体4抗体100 ul

猫睾酮(T)ELISA试剂盒Phospho-PAR4 (Thr163)  酸化蛋白酶活化受体4抗体20 ul

猫多巴(DA)ELISA试剂盒Parkin proin  帕金蛋白抗体100 ul

猫单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)ELISA试剂盒PARP  多腺苷二酸多聚酶抗体100 ul

猫促甲状腺素(TSH)ELISA试剂盒PARP (N-rminus)  多腺苷二酸多聚酶抗体(N端)20 ul

猫雌二(E2)ELISA试剂盒PAX1  配对盒基因1抗体100 ul

猫表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒PAX2  配对盒基因2抗体20 ul

猫白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒PAX3  配对盒基因3抗体100 ul
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。