阴沟肠杆菌PCR检测试剂盒说明书

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建

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特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：产品仅用于科研检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
     5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
蒽酮/9,10-二氢-9-氧蒽/9(10H)-蒽酮/恩酮/9,10-二氫蒽-9-酮/Anthrone 质量规格：>95%,BR 包装;1g

四丁基硫酸氢铵/硫酸氢四丁铵/四丁基硫氢酸铵/正四丁基硫酸氢基铵/四丁基氢铵/硫酸氢化四丁基/TBAHS/IPC-TBA-HS 质量规格：>95%,BR 包装;250mg

4，4-双（二甲氨基）硫代二苯甲酮/4,4-双(二甲氨基)硫代二甲酮/硫代米氏酮/4,4′-四甲基二氨基硫代二苯甲酮/对,对′-四甲基二氨基二苯硫酮/4,4′-双(二甲氨基)硫代二苯甲酮/4,4'-双二甲氨基硫代二苯甲酮/硫代米蚩酮/双[4-(二甲氨基)苯基]甲硫酮/4,4'-双(二基)硫代苯甲酮/Thiomichler's ketone 质量规格：>95%,BR 包装;1g

米氏酮/4，4′-四甲基二氨基二苯甲酮/米蚩酮/米气勒氏酮/四甲对，对′-二氨二苯甲酮/4,4′-双(二甲氨基)二苯酮/四甲基米氏酮/4,4'-二(N,N-二甲氨基)二苯甲酮/4,4’-二(N,N-二甲氨基)二苯酮/4,4’-双(二甲氨基)二苯甲酮/双二甲氨基苯甲酮/4,4′-双(二甲氨基)苯甲酮/Michler's ketone 质量规格：>95%,BR 包装;250mg

苯芴酮/锗试剂/苯基芴酮/苯基荧光酮/2,6,7-三羟基-9-苯基荧光酮/2,6,7-三羟基-9-苯基-3H-呫吨-3-酮/9-苯基-2,3,7-三羟基-6-氧蒽酮/2,6,7-三羟基-9-苯基-6-荧光酮/9-苯基-2,3,7-三羟基-6-荧光酮/Phenylfluorone 质量规格：>95%,BR 包装;5g

1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基吡唑啉酮/1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基-5-吡唑啉酮/4-苯甲酰基-3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/萃取剂II/4-苯甲酰-3-甲基-1-苯基-5-吡唑啉酮/4-苯甲酰基-3-甲基-1-苯基-2-吡唑-5-酮/HPMBP/PMBP 质量规格：>95%,BR 包装;1g

1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮/依达拉奉/3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/3-甲基-1-苯基-5-吡唑啉酮/1,3,5-吡唑酮/1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮/苯基甲基氮茂-5-酮/2,4-二氢-5-甲基-2-苯基-3H-吡唑-3-酮/PMP 质量规格：>95%,BR 包装;5g

1-苯基-3-吡唑烷酮/菲尼酮/菲尼酮A/3-甲基-1-苯基-吡唑啉-5-酮/1,3,5-吡唑酮/3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/1-苯基-3-吡唑啉酮/1-苯基-3-氧-1,2-二氮杂茂/1-苯基-3-吡唑酮/1-苯-3-吡唑啉酮/Phenidone 质量规格：>95%,BR 包装;1g

α-萘酚苯甲醇/α-纳富妥苯/4-[(4-羟基-1-萘基)苯基亚甲基]-1(4H)-萘酮/α-对萘酚苯/对萘酚苯甲醇/4,4’-(α-羟基亚苄基)二(1-萘酚)/α-萘酚基萘酚醌基苯甲烷/α-萘酚醌苯基甲烷/α-萘酚醌烷/α-萘酚苯/1-萘酚苯/α-Naphtholbenzein 质量规格：>95%,BR 包装;5g

偶氮胭脂红B/偶氮洋红B/偶氮红B/Azocarmine B 质量规格：>95%,BR 包装;25g

偶氮胭脂红G/酸性红101/偶氮洋红G/玫红对氮蒽/偶氮红G/罗星杜林/玫红杜林/Azocarmine G 质量规格：>95%,BR 包装;5g

硫堇/劳氏青莲/劳氏紫/氯化-3,7-二氨基吩噻嗪/7-氨基-3-亚氨基-3H-苯并噻嗪氯化氢/3,7-二氨基吩噻嗪-5-翁氯化物/硫槿/氯化劳氏紫/Thionin 质量规格：>95%,BR 包装;100g

酒石黄/肼黄/食用柠檬黄/酸性黄23/1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)-5-吡唑啉酮-3-羧酸三钠盐/食用色素黄色5号/他特秦/ Tartrazine 质量规格：>95%,BR 包装;25g

红/6-羟基-5-［(2-甲氧基-5-甲基-4-磺本基)偶氮］2-萘磺酸二钠盐/红AC/食品红17/大红贝司RC/显色基艳红RB/咖喱红/红 40 [CI 16035]/C.I.冰染重氮组分13/Allura Red AC 质量规格：>95%,BR 包装;5g

日落黄/日落黄FCF/1-对磺酸苯基偶氮-2-羟基萘-6-磺酸二钠盐/食用黄色6号/食品黄3/食用桔黄/Sunset Yellow FCF 质量规格：>95%,BR 包装;5g

丽丝胺罗丹明B/酸性罗丹明B/酸性红52/二甲苯红B/丽丝胺玫瑰红B/里斯沙明玫瑰红B200/李斯曼罗丹明B/李斯曼若丹明B/丽丝胺碱性蕊香红B200/酸性玫瑰红B/酸性桃红B/柴林红B/磺化罗丹明B/奇通红S/硫罗丹明B /Lissamine rhodamine B 质量规格：>95%,BR 包装;100g

酚番红花红/酚藏红花/酚藏花红/3,7-二氨基-5-苯基吩嗪翁氯化物/奎诺二甲基酯/Phenosafranine 质量规格：>95%,BR 包装;25g
阴沟肠杆菌PCR检测试剂盒说明书Penicillium│sp. 中文名称：青霉菌属菌种种属:Penicillium│sp.提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:抗丙肝病毒培养方法培养基:CM0014生长条件:28C存储条件:液氮超低温冻结；-80℃冰箱冻结 纯度：98%

Nocardiopsis│kunsanensis 中文名称：群山拟诺卡氏菌种属:Nocardiopsis│kunsanensis提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:模式菌株:培养方法培养基:CM0038生长条件:28C存储条件:真空冷冻干燥 纯度：98%

Streptomyces│collinus 中文名称：山丘链霉菌种属:Streptomyces│collinus提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:CM0027生长条件:28C存储条件:-80℃冰箱冻结；真空冷冻干燥 纯度：98%

Streptomonospora│halophila 中文名称：嗜盐链单孢菌种属:Streptomonospora│halophila分离基物:盐碱土提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:yes应用领域:模式菌株:培养方法培养基:ISP4+10%NaCl生长条件:37C存储条件:真空冷冻干燥 纯度：98%

Byssochlamys│sp. 中文名称：丝衣霉属种属:Byssochlamys│sp.提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:抗癌活性培养方法培养基:CM0014生长条件:28C存储条件:真空冷冻干燥 纯度：98%

Spicaria│sp. 中文名称：穗霉属种属:Spicaria│sp.提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:抗癌活性培养方法培养基:CM0014生长条件:28C存储条件:真空冷冻干燥 纯度：97%

Streptomyces│coeruleofuscus 中文名称：天蓝褐链霉菌种属:Streptomyces│coeruleofuscus提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:yes应用领域:模式菌株:培养方法培养基:CM0027生长条件:28C存储条件:-80℃冰箱冻结；真空冷冻干燥 纯度：97%

Chaetomium│murorum 中文名称：突孢毛壳种属:Chaetomium│murorum分离基物:土壤提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:CM0014生长条件:26C存储条件:-80℃冰箱冻结；真空冷冻干燥 纯度：99%