PCR技术的定量原理：
扩增曲线
在Real- qPCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号，随着反应的进行，监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线，即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。
在Real-time qPCR扩增早期，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化，此时即为基线期。
PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数形式增加的，随着反应循环数的增加，终PCR反应不再以指数形式生成模板，从而进入“平台期”。在该时期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系，所以根据终的PCR产物量不能计算出初始模板量。
荧光染料的优点：
产品仅用于科研使用简便；
可以与任何PCR产物结合；
价格便宜；
荧光染料的缺点：
不能区分不同的双链DNA
引物二聚体会影响检测的敏感性
非特异性产物会影响结果的敏感性
引物二聚体和非特异性扩增问题可以通过熔解曲线 (Melting curve) 进行识别，进而通过PCR引物的设计和反应条件的优化得以解决。总的来说，SYBR Green I方法是一种基础也的Real-time qPCR实验手段。 产品名称 | 猪嗜血杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Haemophilus suis | 货号 | YSP96781 |
荧光探针：
Real-e qPCR中的荧光探针为TaqMan探针，其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针，该探针的5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团。
正常情况下两个基团的空间距离很近，荧光基因因淬灭而不能发出荧光。PCR扩增时，引物与该探针同时结合到模板上，探针的结合位置位于上下游引物之间。
当扩增延伸到探针结合的位置时，Taq酶利用5'外切酶活性，将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比，因此，根据PCR反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。
TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题，反应结束后无需通过熔解曲线检测，缩短了实验时间。
TaqMan探针技术的优点：
荧光背景低；
敏感性高；
杂交稳定性高；
荧光光谱分辨率好；
特异性高。
TaqMan探针技术的缺点：
成本高；
设计难度大；
只能用于检测产物长度低于150bp的反应。
由于TaqMan探针的高特异性，可用于等位基因的辨别，特别适用于人类基因多态性以及根据SNP区别和定量菌株。
荧光定量PCR原理：
产品仅用于科研荧光定量PCR早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。
一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
扎铵（标准品）二基
甲硫酸新斯的明(标准品)己二酸 甘草酸二（标准品）1,6-已烷二 尼美舒利（标准品）十二烷基伯 盐酸奥昔布宁（标准品）二 奥扎格雷（标准品）甲钠 苄氨酸盐酸脒 苄氨酸（标准品）过氧化脲 5-氨基水杨酸,美沙拉秦(标准品) 5-氨基水杨酸,美沙拉秦2-氨基-2-甲基-1- 盐酸喹那普利（标准品）百里酚酞 爱普列特（标准品）溴甲基四氢吡喃 羟磺酸钙（标准品）2-(1H-并三偶氮L-1-基)-1,1,3,四甲基脲四氟酸酯 异鼠李素-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷（标准品）2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,四甲基脲四氟酸盐 聚（标准品）2,2-二甲基-1, 西吡铵（标准品）2-溴-氨基-6-甲基吡啶 硫酸羟喹（标准品）2-溴-氨基-甲基吡啶 车叶草苷（标准品）环丁砜
猪嗜血杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒AFAP1L2抗体EPEC/E.coli /Gold 胶体金离子标记抗肠致病性大肠杆菌抗体IgG1Kit 神经细胞分化相关蛋白AHNAK抗体EPEC-O6/Gold 胶体金离子标记大肠埃希杆菌O6抗体IgG100 ul 粘合连接相关蛋白1抗体E.coli O139/Biotin 生物素标记抗志贺毒素大肠杆菌O139抗体IgG20 ul 去整合素样金属蛋白酶13抗体E.coli O139/Gold 胶体金离子标记抗志贺毒素大肠杆菌O139抗体IgG100 ul 聚集蛋白抗体E.coli O157/Gold 胶体金离子标记抗大肠埃希氏菌O157抗体IgG100 ul 转录因子AP2α+β抗体E.coli O157/Biotin 生物素标记抗大肠埃希氏菌O157抗体IgG100 ul 酸化腺瘤样息肉抗体Dysferlin/FITC 荧光素标记Dysferlin蛋白抗体IgG100µl 酸化细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体EPEC/E.coli /Biotin 生物素化兔抗肠致病性大肠杆菌抗体IgG100 ul 细胞周期后期促进蛋白亚基10抗体E.coli/Biotin 生物素化兔抗普通大肠埃希菌菌体蛋白抗体IgG100 ul |
