客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。 产品名称 | 犬流感病毒32型探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Canine Influenza Virus H3N2（CIV-H3N2） | 货号 | YSP96512 |
荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
4,4′-二壬基-2,2′-联吡啶(98.0%)Atg12 Antibody (Human Specific)(1-ACETAMIDOCYCLOPROPYL)PHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR 乙(Standard for GC,≥99.5%(GC))Atg12 Antibody (Human Specific)甲基-1-萘酸 乙基(标准品)AE1/SLC4A1 (D3X1R) Rabbit mAb (IF Formulad; Rodent Specific)氯-2,4,5-三氟甲酸 环氧氯烷(Standard for GC,≥99.6%(GC))Atg12 Antibody (Mouse Specific)正硅酸四乙酯 酸乙酯(Standard for GC,≥99.0%(GC))LDHA Antibody异亚基双(环戊二)二氯化锆 酸异辛酯（2-EHA）(标准品)eIF4A (C32B4) Rabbit mAb对磺基偶氮变色酸钠 乙基环己烷(标准品)eIF4A (C32B4) Rabbit mAb溴-氯 乙二(标准品)ZPR1 (LG1) Mouse mAb甲基邻二甲酸 乙二(standard for GC,≥99.5%(GC))p53 (1C12) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)(S)-1-Cbz-氨基吡咯烷盐酸盐 菊酯(标准品)IL2-Rα/CD25 (BC96) Mouse mAb (APC Conjuga)氟-5-羟基甲酸 基阿维菌素甲酸盐(标准品)MSH2 (D24B5) XP® Rabbit mAb氯甲酰乙 乙蒜素(标准品)MSH2 (D24B5) XP® Rabbit mAb4'-正戊基-基联 乙硫(标准品)MEP50 (D56B8) Rabbit mAb2-(氯代基)-2-甲基酸 甲酸乙酯(标准品)Phospho-Tau (Ser404) (D2Z4G) Rabbit mAb (IF preferred)2-硝基-甲砜 甲酸乙酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-Tau (Ser404) (D2Z4G) Rabbit mAb (IF preferred)1-(甲氧氧基)萘 乙二乙(标准品)FoxD3 (D20A9) Rabbit mAb3,二氟三氟甲 芥酸(标准品)Cripto Antibody (Human Specific)2,6-二甲基-1,二酚 灭线标准溶液(1mg/ml,溶剂：甲)Hexokinase I (C35C4) Rabbit mAb溴烷基磺酸钠
犬流感病毒32型探针法荧光PCR检测试剂盒白介素2(IL-2)ELISA试剂盒Ingrin beta 1/CD29 整合素β1抗体100 ul 白介素1受体样1(IL1RL1)ELISA试剂盒Ingrin alpha 5/CD49e 整合素α5抗体100 ul 白介素1受体相关激酶-4(IRAK-4)ELISA试剂盒Ingrin alpha V/CD51 整合素αV抗体100 ul 白介素1受体相关激酶1(IRAK1)ELISA试剂盒Ingrin alpha 6/CD49f 整合素α6抗体100 ul 白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒Ingrin Beta 3/CD61 整合素β3抗体20 ul 白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒JAK1 蛋白质酪氨酸激酶JAK-1抗体100 ul 白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒Phospho-Jak1 (Tyr1022/1023) 酸化蛋白质酪氨酸激酶JAK-1抗体1 Kit 白介素1β转换酶(ICE)ELISA试剂盒JAK2 蛋白质酪氨酸激酶JAK-2抗体100 ul 白介素-1β前体(Pro-IL-1β)ELISA试剂盒phospho-JAK2(Tyr1007+Tyr1008) 酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗体100 ul
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |
