荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。 产品名称 | 鹦鹉喙羽病病毒探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Beak and Feather Disease Virus（BFDV） | 货号 | YSP96432 |
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
无水酸氢二钠(分子生物学级)SMARCA1 (D4Q7V) Rabbit mAb[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯 菲啰,菲洛SirT6 (D8D12) Rabbit mAb6,7-二甲氧基喹唑啉-酮 乙酸钠三水(分子生物学级)DAP12 (D7G1X) Rabbit mAb2,二溴-5-氯吡啶 脱叶灵,噻隆CENP-T Antibody1-甲酰哌 (AR)PRMT4/CARM1 (3H2) Mouse mAb氯-氟酸 乙脱氢酶eIF1 (D7G3L) Rabbit mAb溴吡唑-甲酸 吐温80(化学纯)OS-9 (D8P4G) Rabbit mAb2,5-二溴对二甲酸 吐温80(药用级)Tris Buffered Saline (TBS-10X)2,6-二溴萘 吐温80(细胞培养级)Caldesmon-1 (D5C8D) XP® Rabbit mAb1,6-二羟基萘 亚铁(AR)Caldesmon-1 (D5C8D) XP® Rabbit mAb1-羟基-1H-1,2,三唑-羧酸乙酯 葡萄糖酸(AR)Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)5-甲基喹喔林 PF-562271IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific)5-甲基-2-噻吩甲 海藻酸钠Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAb(R)-氟吡咯烷(HCL) 酸钠Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAb2,7-二溴咔唑 胶原酶I型(sigma)PN Blocking Peptide3,5-二氯吡啶-甲 胶原酶II型(sigma)FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,二氟磺酰 胶原酶IV型(sigma)LC3B (D11) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,二甲基苄基氯 钼酸钠二水(AR)SignalSilence® BRCA1 siRNA I硫代酰乙酯
鹦鹉喙羽病病毒探针法荧光PCR检测试剂盒豚鼠白介素8(IL-8)ELISA试剂盒phospho-EGFR(Tyr1068) 酸化表皮生长因子受体抗体100 ul 豚鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒EGF 表皮生长因子抗体100 ul 豚鼠白介素5(IL-5)ELISA试剂盒VEGFR3 表皮生长因子受体3抗体1 Kit 豚鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒EGF 表皮生长因子抗体（）100 ul 豚鼠白介素22(IL-22)ELISA试剂盒EGFL7 类表皮生长因子域7抗体100 ul 豚鼠白介素2(IL-2)ELISA试剂盒EGFR 表皮生长因子受体抗体100 ul 豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒EF1 Alpha 延伸因子EF-1a抗体100 ul 豚鼠白介素1β(IL1B)ELISA试剂盒EGFRvIII 表皮生长因子受体III型突变体抗体100 ul 豚鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒Egr-1 早期生长应答蛋白1抗体1 Kit |
