客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。 产品名称 | 水牛泰勒虫探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Theileria buffeli | 货号 | YSP97267 |
荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
肌动蛋白聚合作用（polymerization）检测试剂盒 GRK5 ELISA Kit 20 ul 体外微管蛋白聚合作用（polymerization）比色法检测试剂盒（300微克，标准样） Mortalin(75 kDa glucose-regulated protein) ELISA Kit 100 ul 纯化微管蛋白（Tubulin） GTDC1 ELISA Kit 1 Kit 体外微管蛋白聚合作用（polymerization）荧光检测试剂盒 GRK6 ELISA Kit 100 ul 体内微管蛋白聚合作用（polymerization）检测试剂盒 GRPEL1 ELISA Kit 100 ul 细胞骨架（肌动蛋白微丝；F-ACTIN）绿色荧光染色试剂盒 GSDMD ELISA Kit 100 ul 细胞骨架（肌动蛋白单体；G-ACTIN）红色荧光染色试剂盒 GRWD1 ELISA Kit 100 ul 微管（microtubules）荧光染色试剂盒 GSDMB ELISA Kit 1 Kit 粘着斑蛋白（vinculin）荧光染色试剂盒 GSPT1 ELISA Kit 100 ul 驱动蛋白（kinesin）型ATP酶活性酶连续反应光谱法定量检测试剂盒 GSG1L ELISA Kit 100 ul 3,4-二氢嘧啶酮衍生物Monastrol（K-ATPase 抑制剂） GSPT2 ELISA Kit 100 ul 细胞αSMA蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 GPRIN3 ELISA Kit 100 ul 载玻片细胞αSMA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 GPS2 ELISA Kit 100 ul 冰冻切片组织αSMA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 GPSM2 ELISA Kit 100 ul 石蜡切片组织αSMA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 GPX4 ELISA Kit 100 ul 载玻片细胞αSMA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 GPX7 ELISA Kit 100 ul
水牛泰勒虫探针法荧光PCR检测试剂盒G蛋白α抑制蛋白1抗体PARC/CCL18(Human pulmonary activation regulad chemokine) ELISA Kit 肺部活化调节趋化因子100 ul 生长停滞特异性蛋白6抗体MAdCAM-1(Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1) ELISA Kit 黏膜地址素细胞黏附分子100 ul 谷胱甘肽合成酶抗体IFN- Beta/IFNB(Human Inrferon Beta) ELISA Kit β干扰素300 ul 血型糖蛋白δ抗体sCD38(Human Soluble Clusr of differentiation 38) ELISA Kit 可溶性CD38100 ul 糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白抗体CR2/sCD21(Human Soluble Clusr of differentiation 21) ELISA Kit 可溶性CD21300 ul γ-谷氨酰转肽酶6抗体sLR(Human Leptin Soluble Receptor) ELISA Kit 可溶性瘦素受体100 ul G氨基丁酸受体δ/GABAA Rδ抗体TLR-9/CD289(Human Toll-like receptor 9) ELISA kit Toll样受体9100 ul G氨基丁酸受体γ1/GABAA Rγ1抗体TGF Beta2(Human transforming growth factors Beta2) ELISA Kit 转化生长因子β2100 ul 酸化γ氨基丁酸γ2受体抗体MCP-4/CCL13(Human monocy chemotactic proin 4) ELISA kit 单核细胞趋化蛋白4100 ul
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |
