样品RNA的抽提: ①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 产品名称 | 犬轮状病毒探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Canine Rotavirus(CRV) | 货号 | YSP96516 |
实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 荧光定量PCR试剂盒技术: 本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 乙(梯度色谱级, ≥99.9%)ENPP1 (L520) Antibody二氯二己基硅烷 无水乙(无水级, 99.9%,H2O≤10ppm)Histone Deacetylase 1 (HDAC1) AntibodyDL-氨酰甘氨酸 无水乙(H2O:20-30ppm)IQGAP1 (D8K4X) XP® Rabbit mAb吲哚-酸 无水乙(无水级, 99.8%,H2O:30-50ppm)IQGAP1 (D8K4X) XP® Rabbit mAb羟基-2-甲基喹啉 茴香(分析标准品,用于萜分析,≥99.5% (GC))WIF1 Antibody(R)-羟基-2 氨基-(三氟甲基)甲(98%)Ribosomal Proin L26 Antibody反式-基环己烷甲酸 乙(LC-MS)MRPL11 (D68F2) XP® Rabbit mAb4,4'-双[N-(1-萘基)-N-氨基]-4''-基三 甲中标样(分析标准品 基体:甲)eIF4E (C46H6) Rabbit mAb1,二甲基-2-(2-噻吩基)咪唑烷 2-氨基-乙基吡啶(97%)eIF4E (C46H6) Rabbit mAb2,二甲基呋喃 N,O-双(*基硅烷基)三氟乙酰(96%)eIF3C Antibody氯-2-氟甲 山嵛酸(标准品)DLK1 Antibody2,3,6-三氟溴苄 对溴氯(标准品)ENPP1 Antibody (Human Specific)三五氟酯 溴酚(标准品)Met (D1C2) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1,二异基 对醌(用于光谱测定,≥99.5%(HPLC))Mili Antibody吡啶-磺酸钠 乙基叔丁基(标准品)MATK/CHK (D2I6U) Rabbit mAb8-甲氧基-并[g] 对羟基甲酸正丁酯(标准品)Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Antibody2-羟基-3,5,5-*基-2-环己-1-酮 溴代异烷(标准品)Naked2 (C67C4) Rabbit mAbN-(METHOXYBENZYL) BORONOBENZAMIDE 乙酸苄酯(标准品)Naked2 (C67C4) Rabbit mAb氯-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸乙酯 犬轮状病毒探针法荧光PCR检测试剂盒阿立新A(Orexin A)ELISA试剂盒KLF8 KLF样转录因子8抗体100 ul κB抑制蛋白激酶(IKK)ELISA试剂盒KLF9 转录因子KLF9抗体100 ul γ谷氨酰转移酶(GGT)ELISA试剂盒KLF13/RFLAT-1 肠道内富含的Kruppel样因子13100 ul γ-谷氨酰环化转移酶(GGCT)ELISA试剂盒KLH 血蓝蛋白抗体100 ul γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)ELISA试剂盒KLH 血蓝蛋白抗体100 ul γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒KLK1 激肽释放酶1抗体100 ul γ干扰素诱导单核细胞因子(MIG/CXCL9)ELISA试剂盒kappa Opioid receptor kappa型阿片受体抗体100 ul γ干扰素受体(IFN-γR)ELISA试剂盒mu Opioid receptor µ-型阿片受体抗体100 ul γ干扰素(IFN-γ)抗体ELISA试剂盒Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375) 酸化µ-型阿片受体抗体100 ul |