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足马杜拉分枝菌探针法荧光PCR检测试剂盒

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更新日期:
2020-12-01
点击次数:
120
产品特点:
足马杜拉分枝菌探针法荧光PCR检测试剂盒注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
  50次足马杜拉分枝菌探针法荧光PCR检测试剂盒的详细资料:

客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。

 产品名称

足马杜拉分枝菌探针法荧光PCR检测试剂盒

 英文名称

 Madurella mycetomatis

 货号

 YSP96897

荧光定量PCR试剂盒制造技术:
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1)紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
3,3',4,4'-二甲酮四甲酸二酐(>90.0%(T))2-羟基-5-氨基吡啶盐酸盐

1,2,3,环戊烷四羧酸二酐(>98.0%(T))5--2-羟基吡啶

1,2,3,环丁四甲酸二酐(>98.0%(T))-2-(三氟甲基)喹啉

1,2,4,5-环己烷四甲酸二酐(>98.0%(T))2-(三氟甲基)喹啉-

5-(2,5-二氧代四基)-甲基-环己-1,2-二羧酸酐(>95.0%(T))溴-2-三氟甲基喹啉

(2,5-二氧代四-基)-1,2,3,四氢萘-1,2-二甲酸(>95.0%(HPLC)(T))2-甲砜基-5-三氟甲基-1,3,噻二唑

三环[6.4.0.02,7]十二烷-1,8:2,7-四羧酸二酐(>98.0%(GC))2-(三氟甲基)烟酸

ε-己内酯(>99.0%(GC))2-三氟甲基烟酸甲酯

β-内酯(>95.0%(GC)(T))三氟甲基烟酸酯

DL-交酯(>98.0%(T))2-溴-甲基嘧啶

L-(-)-交酯(>98.0%(T))2-溴四醌

δ-戊内酯(>98.0%(GC))6--2-甲基喹啉

DL-羟基丁酸(含高分子酯化产品)(>75.0%(T))6-羟基-2-甲基喹啉

1-(酰氧基)-(甲基酰氧基)-2-(含稳定剂MEHQ)(>80.0%(GC))2-甲基-7-氨基喹啉

酸1,丁二二甲酯(含稳定剂MEHQ)(>95.0%(GC))2-甲基-7-甲氧基喹啉

1,6-二(酰氧基)-2,2,3,3,4,4,5,5-八氟己烷(>90.0%(GC))2-甲基-7-羟基喹啉

1,9-双(酰氧基)壬烷(含稳定剂MEHQ)(>92.0%(GC))7-溴-2-甲基喹啉

1,双(酰氧基)丁烷(含稳定剂MEHQ)(>90.0%(GC))8-氨基喹哪啶
足马杜拉分枝菌探针法荧光PCR检测试剂盒CD38抗体MST1/FITC  荧光素标记蛋白激酶MST抗体IgG100 ul

CD38抗体Phospho-Mst1 (Thr183)/Mst2 (Thr180) /FITC  荧光素标记酸化蛋白激酶MST抗体IgG100 ul

碳酸酐酶1抗体MT/FITC  荧光素标记金属硫蛋白抗体IgG20 ul

碳酸酐酶2抗体MTA1/FITC  荧光素标记肿瘤转移相关蛋白1抗体IgG100 ul

丝/苏氨酸蛋白质激酶抗体MTHFR/FITC  荧光素标记亚甲基四氢叶酸还原酶抗体IgG100 ul

α-连环蛋白抗体(钙粘蛋白相关蛋白)Canin αMTL/FITC  荧光素标记胃动素抗体IgG100 ul

癌易感基因2相互作用蛋白抗体MTLR/FITC  荧光素标记抗胃动素受体抗体IgG100 ul

细胞质连接蛋白1抗体MTNR1A/MTR-1A /FITC  荧光素标记褪黑素受体1A/松果体素受体1A抗体IgG100 ul

盘状结构域受体蛋白2抗体MTNR1B/MTNR-1B/FITC  荧光素标记褪黑素受体1B抗体IgG100 ul
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μ
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。

 

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