荧光定量PCR试剂盒制造技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。 产品名称 | 猪细小病毒探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Porcine Parvovirus(PPV) | 货号 | YSP97095 |
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 95% 勒氏寡食单胞菌 5g 核糖体蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 苹果交链孢 5g 骨髓基质细胞抗原1(BST1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 阪崎肠杆菌 100g Saitohin蛋白(STH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 枯草芽孢杆菌 25g 腺苷A2b受体(ADORA2b)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 嗜热脂肪地球芽胞杆菌 10g 鸟苷酸环化酶激活因子2B(GUCA2B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 95% 微小毛霉 1g 组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ≥98% 绿针假单胞菌 25g 饥饿素(GHRL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ≥98% 斯氏假单胞菌 5g 生长分化因子11(GDF11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 日本根霉 1g SPARC样蛋白1(SPARCL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 球形赖氨酸芽孢杆菌 250mg 防御素β112(DEFβ112)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) >98.0%(GC) 蜡磨属 1g 血管生成素样蛋白6(ANGPTL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) >98.0%(GC) 黑曲霉 25g IgG-Fc片段低亲和力受体Ⅲa(FcγR3A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) >98.0%(GC) 枯草芽孢杆菌 5g 信号传导转录激活因子3(STAT3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 75% 拟黑马朗假丝酵母 25ml 载脂蛋白C3(APOC3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 95% 枯草芽孢杆菌 250mg 载脂蛋白C2(APOC2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 耶纳农球菌 50g Janus激酶2(JAK2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 中慢生华癸根瘤菌 5g 旁血小板溶蛋白(PPL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98%,含0.1%碳酸钙稳定剂 黑曲霉 25g
猪细小病毒探针法荧光PCR检测试剂盒嗜酸粒细胞趋化蛋白24抗体NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1) 一氧化氮合成酶-1（抗原）100 ul 巨噬细胞炎性蛋白15NOS-2 (iNOS) Nitric Oxide Synthase,Inducible 一氧化氮合成酶-2（抗原）100 ul 巨噬细胞炎性蛋白抗体Batroxobin 蛇***毒***巴***曲***酶***抗***原20 ul CD72蛋白抗体NOS-3 (eNOS) endotheli cell NOS 一氧化氮合成酶-3（抗原）100 ul 中心体蛋白128抗体NPY ( Neuropeptide Y) 神经肽 Y（抗原）100 ul 着丝粒蛋白O抗体NR2B (Glutama receptor) 谷氨酸受体（抗原）20 ul 3号染色体开放阅读框17抗体NT-3 神经生长因子-3（抗原）100 ul 细胞质膜微囊蛋白-2抗体NT-4,NT-5 神经生长因子4/5（抗原）10 ug 酸化细胞质膜微囊蛋白-2抗体NTN (Neurturin) 神经生长因子（抗原）10 ug |
