样品RNA的抽提: ①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 产品名称 | 人葡萄球菌探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Staphylococcus hominis | 货号 | YSP97210 |
实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 荧光定量PCR试剂盒技术: 本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 转化因子2α(TRA2α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 固氮野野村氏菌 5g 酪氨酸磺基转移酶2(TPST2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 美澳型核果褐腐病菌 100g 酪氨酸磺基转移酶1(TPST1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 小炭球菌 25g 胸苷酸合成酶(TYMS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 浅多色链霉菌 100g 干扰素α17(IFNα17)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 鲁氏接合酵母 25g 干扰素α16(IFNα16)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 乳酸乳球菌 500g 干扰素α14(IFNα14)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 木伏革菌=佐佐木薄膜革菌 100g 干扰素α13(IFNα13)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 黄杆菌 500g 干扰素α10(IFNα10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 变黑梨花欧文氏菌 1g 干扰素α8(IFNα8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 球形节杆菌 100g 干扰素α7(IFNα7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 拟茎点霉 25g 干扰素α6(IFNα6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 99% 酿酒酵母 5g 干扰素α5(IFNα5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 黑曲霉 1g 谷氧还蛋白5(GLRX5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 简青霉 5g 谷氧还蛋白2(GLRX2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 酿酒酵母 1g Tescalcin蛋白(TSC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 蜡样芽胞杆菌 (蜡状芽胞杆菌) 250mg tRNA酸转移酶1(TRPT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 根瘤菌 5g 跨膜蛋白5(TMEM5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 季也蒙假丝酵母 100g 人葡萄球菌探针法荧光PCR检测试剂盒酰基辅酶A合成酶4抗体Metronidazole/KLH 甲硝唑偶联牛血蓝蛋白100 ul 补体因子D抗体Morphine/BSA 与牛血清蛋白偶联物100 ul 补体因子I轻链抗体TRF(transferrin) 转铁蛋白1 Kit FAHD1蛋白抗体Melamine/OVA 三聚偶联鸡卵白蛋白100 ul 酸化粘着斑激酶抗体Melamine/BSA 三聚偶联牛血清白蛋白20 ul 酸化粘着斑激酶抗体GABA/KLH γ1氨基丁酸偶联血蓝蛋白100 ul 下颌发育不良综合征相关蛋白FAKD3抗体GABA/BSA γ1氨基丁酸偶联牛血清白蛋白100 ul FAM134B蛋白抗体OCT2 (Octamer-binding transcription factor 2) 阳离子转运蛋白2抗原1 Kit 酸化范可尼贫血组蛋白A抗体IL-1 Alpha 白介素-1α100 ul |