牛肾盂肾炎棒杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒

荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
邻二甲(>99.0%(GC))Phospho-VASP (Ser157) Antibody四丁基高

2-氨基吡啶(>99.0%(GC)(T))Phospho-RIP (Ser166) Antibody (Rodent Specific)洛匹那韦

2-氨基硫酚(>95.0%(T))VASP Antibody2,5-二氟酸

丹磺酰肼(>95.0%(HPLC)(T))HNF4α (C11F12) Rabbit mAb硝酸四甲基铵

DBD-H [=(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,并恶二唑(>98.0%(HPLC))Phospho-VASP (Ser239) Antibody2-二吡啶基酮

NBD-H (=肼基-7-硝基-2,1,并恶二唑肼)(>98.0%(HPLC))Phospho-VASP (Ser239) Antibody2-羟基-丁酸酮

1,环己二酮(>98.0%(GC)(T))IFN-α (8C21) Mouse mAb2-乙炔基吡啶

ABD-F[=(氨磺酰)-7-氟-2,1,并恶二唑](>98.0%(N)(T))SimpleChIP® Human ERRFI1 Upstream PrimersN-苄氧羰基--6-氨基己酸

二茂铁乙酸(>97.0%(GC))IL-1β (D6D6T) Rabbit mAb (Mouse Specific)1-氯异喹啉

(肼基羰基)二茂铁(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色谱标记)Phospho-Met (Tyr1349) AntibodyN-甲基-硝基苄

(2R)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2,5,7,8-四并二氢吡喃-2-羧酸琥珀酰亚酯Smad2 (86F7) Rabbit mAbN-甲基-硝基苄

二茂铁甲酸 N-琥珀酰亚酯(>98.0%(HPLC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr1009) (42F9) Rabbit mAb醋酸锰

1-丁(>99.0%(GC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr1009) (42F9) Rabbit mAb氯-甲基吡啶盐酸盐

环己烷(>99.5%(GC))Phospho-Rpb1 CTD (Ser2) (E1Z3G) Rabbit mAb (Biotinylad)L-基甘氨酸

己烷(>96.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1234/1235) Antibody6-羟基吡啶-2-羧酸

2,2,*基戊烷(>99.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1234/1235) Antibodytrans-甲氧基肉桂

异(>99.5%(GC))ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)2,二氯-5-甲氧基嘧啶

甲基环己烷(>99.0%(GC))Met (25H2) Mouse mAb1,2,6,7-四氢-8H-茚并[5,b]呋喃-8-酮
牛肾盂肾炎棒杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒鸡甘油-3-酸脱氢酶(GAPDH)ELISA试剂盒Phospho-PEA15 (Ser116)  酸化星形胶质细胞PEA15抗体100 ul

鸡甘肽(GAL)ELISA试剂盒PEDF  色素上皮源性因子抗体100 ul

鸡钙结合蛋白(CALB2)ELISA试剂盒PEG10  肝癌高表达基因抗体100 ul

鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA试剂盒PEG3  PEG3蛋白抗体100 ul

鸡肺炎支原体(MP)抗体(IgG)ELISA试剂盒Enkephalin  脑啡肽抗体20 ul

鸡多巴(DA)ELISA试剂盒PEPT1  肠道肽转运蛋白1/小肽转运蛋白1抗体100 ul

鸡凋亡相关因子(FAS)ELISA试剂盒PEPT2/SLC15A2  肠道肽转运蛋白2抗体100 ul

鸡低密度脂蛋白(LDL)ELISA试剂盒peripherin  外周蛋白抗体1 Kit

鸡的牛血清白蛋白(BSA)ELISA试剂盒PERK  蛋白激酶样内质网激酶抗体1 Kit