博兹曼荧光杆菌PCR检测试剂盒说明书

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建

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特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：产品仅用于科研检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
     5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
硫柳汞钠/乙基汞硫代杨酸钠/硫柳汞酸钠/乙汞硫杨酸钠盐/乙基噻吩酸钠盐/乙汞硫柳酸钠/Merthiolate sodium 质量规格：D,99.9% 包装;1g

钠/叠氮钠/迭氮钠/迭氮化钠/Sodium azide 质量规格：D,99.9% 包装;250mg

间苯二酚/雷琐辛/树脂酚/间二羟基苯/1,3-苯二酚/1,3-二羟基苯/雷锁酚/Resorinol 质量规格：D,99.5%, acidity 90% IN D2O  包装;250mg

2-氨基酚/2-氨基苯酚/邻氨基苯酚/邻氨基酚/2-羟基/2-氨基-1-羟基苯/邻羟基/2-Aminophenol 质量规格：D, 99%, acidity 96-98% IN D2O  包装;100g

3-氨基酚/间氨基酚/间氨基苯酚/3-羟基/3-氨基-1-羟基苯/3-氨基苯酚/间羟基/毛皮棕EG/乌尔兹EG/3-Aminophenol 质量规格：D,99.5%, acidity 90% IN D2O  包装;500g

4-氨基酚/对氨基酚/4-氨基苯酚/对氨基苯酚/4-羟基/4-氨基-1-羟基苯/对羟基/P-氨基苯酚/4-Aminophenol 质量规格：D, 99.5%  DCL 20% IN D2O  包装;1g

重蒸酚/苯酚/羟基苯酚/酚/石炭酸/羟基苯/工业酚/石碳酸/Phenol 质量规格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O 包装;5g

饱和酚/平衡酚/Phenol Water 质量规格：D, 99.5%  DCL 20% IN D2O  包装;1g

Tris-饱和酚/Tris平衡苯酚/Tris平衡酚/Tris-Phenol 质量规格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O 包装;1g

三季铵酚/加拉铵/2-[2,6-双(2-三乙基铵乙氧基)苯氧基]乙基三乙基铵三化物/驰肌/化浸酚铵/Gallamine triethiodide 质量规格：D, 99.5%  DCL 20% IN D2O  包装;25g

3，5-二羟基甲苯/合5-甲基间苯二酚/3,5-甲苯二酚/甲基树脂酚/苔黑酚/苔黑素/5-甲基间苯二酚/俄耳辛/衣酚/地衣酚/3,5-二羟基甲苯一物/5-甲基-1,3-苯二酚/台黑酚/3,5-Dihydroxytoluene 质量规格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O 包装;5g

对苯二酚/氢醌/1,4-二羟基苯/几奴尼/海得/1,4-苯二酚/鸡纳酚/孔奴尼/羟基苯酚/Hydroquinone 质量规格：D,99% 包装;100g

4-乙酰氨基酚/对乙酰氨基酚/对乙酰氨基苯酚/扑热息痛/N-乙酰对氨基酚/对羟基乙酰/N-(4-羟基苯基)乙酰胺/醋氨酚/对羟基苯基乙酰胺/APAP 质量规格：D,99.5%+0.05%TMS 包装;25g

香芹酚/香荆芥酚/异丙基甲苯酚/羟基异丙基甲苯/香旱芹菜酚/香旱芹子油酚/异丙基邻甲酚/2-甲基-5-异丙基-1-苯酚/5-异丙基-2-甲基苯酚/2-甲基-5-异丙基苯酚/异百里酚/2-对伞花酚/2-羟基对伞花烃/2-羟基对异丙基甲苯/Carvacrol 质量规格：D,99.5% 包装;500g

丁香油酚/丁子香酚/丁香酚/丁子香酸/4-烯丙基-2-甲氧基苯酚/2-甲氧基-4-烯丙基酚/4-烯丙基愈疮木酚/2-甲氧基-4-(2-基)苯酚/2-甲氧基-4-基苯基苯/烯丙基甲氧基苯酚/异丁香酚苯/Eugenol 质量规格：D,99.5%+0.03%TMS 包装;1g

2-甲氧基酚/愈创木酚/2-甲氧基苯酚/甲基儿茶酚/邻羟基苯甲醚/邻甲氧基苯酚/2- Methoxyphenol 质量规格：D,99.5% 包装;5g

3-甲氧基酚/3-羟基茴香醚/3-甲氧基苯酚/3-羟基苯甲醚/间羟基苯甲醚/间甲氧基酚/间苯二酚一甲醚/1-羟基-3-甲氧基苯/对甲氧基苯酚/间甲氧基苯酚/间苯二酚单甲醚/3-Methoxyphenol 质量规格：D,99.5%+0.03%TMS 包装;500ug
博兹曼荧光杆菌PCR检测试剂盒说明书Yarrowia│lipolytica 中文名称：解脂耶罗维亚酵母种属:Yarrowia│lipolytica分离基物:生物样/红海榄/枝提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:近海酵母培养方法培养基:513生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法 纯度：>98.0%(GC)

Cryptococcus│aureus 中文名称：金色隐球酵母种属:Cryptococcus│aureus分离基物:沉积物/表层沉积物提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:生物转化微生物/蛋白含量高培养方法培养基:513生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法 纯度：>98.0%(GC)

Micrococcus│terreus 中文名称：土微球菌种属:Micrococcus│terreus分离基物:沉积物/多管沉积物提供形式:冻干物模式菌株:no应用领域:未检测到果胶酶、酪蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、琼脂酶，检测到过氧化氢酶培养方法培养基:471生长条件:30℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：90%

Ectothiorhodospira│sp. 中文名称：外硫红螺菌种属:Ectothiorhodospira│sp.分离基物:样/盐场表层泥提供形式:其它安全等级:1模式菌株:no应用领域:微生物/耐盐碱菌培养方法培养基:1004生长条件:25-35℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：90%

Vibrio│ponticus 中文名称：黑海弧菌种属:Vibrio│ponticus分离基物:样/海提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:科研参考菌株培养方法培养基:471生长条件:26℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：90%

Vibrio│mediterranei 中文名称：地中海弧菌种属:Vibrio│mediterranei分离基物:沉积物/海洋沉积物提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:yes应用领域:模式菌株:培养方法培养基:471生长条件:26℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：98%

Phenylobacterium│sp. 中文名称：苯基杆菌种属:Phenylobacterium│sp.分离基物:样/上层海提供形式:冻干物安全等级:1模式菌株:no应用领域:海洋可培养细菌多样性研究培养方法培养基:511生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：98%

Isoptericola│variabilis 中文名称：变异白蚁菌种属:Isoptericola│variabilis分离基物:沉积物/重力活塞取样提供形式:斜面培养物模式菌株:no应用领域:海洋放线菌培养方法培养基:471生长条件:28℃存储条件:液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：97%,含 900 ppm MEHQ 稳定剂