帕腊南病毒PCR检测试剂盒说明书

实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建
服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

​

使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：产品仅用于科研检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
     5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
彩虹245plus广谱蛋白Marker（5-245KD)　　20T(100ul)　别名　预染彩虹蛋白marker英文名称　ColorMixed Protein Marker(5-245KD)储存条件　-20℃，有效期2年单位　支产品特点：　l 三色预染，颜色鲜亮，条带整齐，便于观察。　l 稳定性能突出，经检测4℃放置两年无明显降解。　l 用量少，节约成本，仅5ul即可完美呈现（1.5mm，10孔梳）。　l 广谱多带，一支即可满足多种实验需求。　产品简介：　本产品包含13种彩色预染的已知分子量标准蛋白，分子量范围为5kD-245kD，每种蛋白含量约为0.2-0.4mg/ml。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的10条彩色蛋白条带，其中25kD为绿色条带，75kD为红色条带，其余10条是蓝色条带。　

超低分子量蛋白质Marker(3.3-20.1kDa)　　15T　英文名称　Protein Marker(3.3kD-20.1kD)储存条件　-20℃，有效期1年单位　支产品简介:　本产品包含3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3. 3kD-20. 1kD。 可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种蛋白含量约为15-22.5μg，配有一支1×上样缓冲液。　凝胶制备及染色注意事项:　1. 先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时，30v跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。　2. 由于多肽所含的氨基酸数目较少，因此如该多肽含有过多的极性氨基酸(碱性或酸性)，则会影响其在SDS-PAGE图上的条带迁移率，即其表观分子量可能和多肽的氨基酸理论推算分子量有一定距离。　3. 由于SDS-PAGE的图谱上，蛋白质对数分子量和迁移率成正比直线关系的分子量范围为15,000-200,000，因此对于分子量小于10000的蛋白质或多肽的分子量，只能根据标准分子量进行估计，推断其是否落入预测的分子量范围。　4. 由于超低分子量多肽（3000及3000以下），极易从凝胶上浸出，因此染色及脱色时间不宜太长，脱色后凝胶也不宜在水中浸泡保存过久，否则条带会消失。　5. 电泳之后可将胶置于固定液中固定20分钟，再进行染色，能得到较好的蛋白条带；如时间不允许，也可不进行固定直接染色。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(货号:P1300)，该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。　

1M DTT溶液/二硫苏糖醇　　1ml　别名　二硫苏糖醇;1,4-二硫代-DL-苏糖醇;1,4-二巯基-DL-苏糖醇;1,4-二巯基-2,3-丁二醇;英文名称　1,4-Dithio-DL-threitol;Threo-1,4-dimercapto-2,3-butandiol分子式　C4H10O2S2分子量　154.25储存条件　-20℃，有效期1年单位　瓶DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。是一种还原蛋白质S-S键的试剂；生化研究用作巯基保护剂；酶的专一性抑制剂；测定酶活力。　

预染超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-31.0kD)　　20T　英文名称　Prestained Protein Marker(3.3kD-31.0kD)储存条件　-20℃，有效期1年产品简介　本产品包含预染的3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3. 3kD-31. 0kD。可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经Tricine-甘油SDS-PAGE凝胶电泳时以及转移到PVDF或NC膜上可看到清晰的5条蓝色的蛋白条带。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种预染蛋白含量约为40μg，配有一支1×上样缓冲液。　使用说明:　1. 开封后，溶于200 μ1 1×上样缓冲液，可根据需要进行小量分装，每管10 μl，-20℃贮存，每次取一管使用，避免反复冻融。　2. 使用前取分装后的小管室温融化后即可上样电泳。　

4×SDS-PAGE分离胶缓冲液(PH=8.8)　　100ml　英文名称　SDS-PAGE Separating Gel Buffer，4×(pH 8.8)储存条件　RT，有效期1年本试剂是由Tris和SDS混合而成的，主要用于SDS-PAGE凝胶（变性聚丙烯酰胺凝胶）制备实验。配制分离胶时，10ml制胶体系中加入2.5ml（4倍稀释）。　组分                              浓度　Tris-HCl（pH=8.8）    1.5mol/L 　SDS                              0.4%（W/V）　
帕腊南病毒PCR检测试剂盒说明书磷化蛋白激酶AKT1抗体Dictamnine别名: 分子式: C12H9NO2性状: Powder纯度: 99.0%特色服务: 随货提供1H-NMR等报告关键词: 中药对照品；中药标准品；植物提取物；天然产物；天然产物库

磷化蛋白激酶AKT1抗体Melatonin别名: 分子式: C13H16N2O2性状: Powder纯度: 99.0%特色服务: 随货提供1H-NMR等报告关键词: 中药对照品；中药标准品；植物提取物；天然产物；天然产物库

磷化蛋白激酶AKT1抗体L-Carnitine别名: 分子式: C7H15NO3性状: Powder纯度: 99.0%特色服务: 随货提供1H-NMR等报告关键词: 中药对照品；中药标准品；植物提取物；天然产物；天然产物库

乙醛脱氢酶2型抗体Glutathione别名: 分子式: C10H17N3O6S性状: Powder纯度: 98.5%特色服务: 随货提供1H-NMR等报告关键词: 中药对照品；中药标准品；植物提取物；天然产物；天然产物库

γ-氨基丁醛脱氢酶抗体trahydropalmatine别名: (+)-trahydropalmatine; 右旋四氢巴马汀分子式: C21H25NO4性状: Powder纯度: 98.5%特色服务: 随货提供1H-NMR等报告关键词: 止痛；镇静；催眠；紫堇属；小檗碱；中药对照品；中药标准品；植物提取物；天然产物；天然产物库

衰老相关蛋白5抗体Aglain B别名: 分子式: C36H42N2O8性状: Powder纯度: 96.0%特色服务: 随货提供1H-NMR等报告关键词: 米仔兰属；植物提取物；天然产物；天然产物库

磷化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链抗体(-)-Corlumine别名: 分子式: C21H21NO6性状: Powder纯度: 98.0%特色服务: 随货提供1H-NMR等报告关键词: GABA拮抗剂；惊厥剂；紫堇属；植物提取物；天然产物；天然产物库

釉基质蛋白抗体Conquinamine别名: Epiquinamine分子式: C19H24N2O2性状: Brown powder纯度: 98.0%特色服务: 随货提供1H-NMR等报告关键词: 金鸡纳属；植物提取物；天然产物；天然产物库