贝尔格莱德病毒型PCR检测试剂盒说明书

实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建
服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

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使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 产品仅用于科研先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：产品仅用于科研检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
     5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
氨甲蝶呤/甲氨蝶呤/甲氨基叶酸/氨甲叶酸/对-[(2,4-二氨基喋啶-6)-N-甲基甲氨基]苯甲酰谷氨酸/二合氨甲嘌呤/(+)氨甲蝶呤/N-[4-[[(2,4-二氨基-6-蝶啶)甲基]甲氨基]苯甲酰]-L-谷氨酸/MTX 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;100g

N6-异戊烯基腺嘌呤/异戊烯酰嘌呤/6-(γ,γ-二甲基烯丙基胺)嘌呤/6-(γ,γ-二甲基烯丙基氨基)嘌呤/2-IP 质量规格：HPLC≥97%，标准品 包装;25g

N6-苯甲酰基腺嘌呤/N-(5H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺/N-苄基氨基嘌呤/N6-Benzoyladenine 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;5g

/N-二甲氨基琥珀酰胺酸/N-二甲基琥珀酰肼/比久/调节剂995/丁二酸单(2,2-二甲基酰肼)/丁二酸-N,N-二甲基酰肼/N-二基琥珀酰胺/琥珀酸2，2-二/单(2,2-二甲基酰肼)丁二酸酰肼/DMASA/SADH/B9 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;1g

乙烯利/2-氯乙基磷酸/乙烯磷/艾斯勒尔/玉米健壮素/(2-氯乙基)膦酸/2-氯乙基膦酸/Ethephon 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;5g

3-吲哚乙酸/吲哚-3-乙酸/氮茚基乙酸/杂茁长素/吲哚乙酸/β-吲哚乙酸/2-(3-吲哚基)乙酸/生长素/3-吲哚醋酸/IAA/IUPAC 质量规格：HPLC≥99%,标准品 包装;1g

3-吲哚乙酸钠/吲哚-3-乙酸钠/吲哚乙酸钠/IAA-Na 质量规格：≥98%,BR 包装;5g

3-吲哚丙酸/吲哚丙酸/吲哚-3-丙酸/氮茚基丙酸/3-（3-吲哚基）丙醇/IPA 质量规格：HPLC≥98%，标准品 包装;1g

3-吲哚丙酸钾/吲哚丙酸钾/吲哚-3-丙酸钾/IPA-K 质量规格：含量测定 包装;250mg

3-吲哚丁酸/吲哚丁酸/4-(吲哚-3-基)丁酸/3-吲哚基丁酸/吲哚-3-丁酸/氮茚基丁酸/IBA/IUPAC 质量规格：>99%,SGLT-2抑制剂 包装;25g

3-吲哚丁酸钾/吲哚丁酸钾/吲哚-3-丁酸钾/IBA-K 质量规格：>95%,BR 包装;5g

α-萘乙酸/1-萘乙酸/1-萘基乙酸/α-萘醋酸/2-(1-萘基)乙酸/NAA 质量规格：鉴别 包装;1g

α-萘乙酸钾/1-萘乙酸钾/NAA-K 质量规格：含量测定 包装;5g

β-萘乙酸/2-萘乙酸/β-萘醋酸/β-Naphthaleneacetic acid 质量规格：检查 包装;1g

多效唑/1-对-2-(1,2,4-三唑-1-基)-4,4-二甲-3-戊醇/(2RS,3RS)-1-(4-)-4,4-二甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)戊-3-醇/氯丁唑/1-(4-)-4,4-二甲基-2-(1,2,4-三唑-1-基)-3-戊醇/Paclobutrazol/PP333 质量规格：含量测定 包装;5g

三十烷醇/1-三十烷醇/蜂花醇/正三十烷醇/三十醇/1-羟基三十烷/蜂花烷醇/Triacontanol 质量规格：>99%,BR 包装;5ml

马来酰肼/青鲜素/1,2-二氢-3,6-哒嗪二酮/顺二酰肼/抑芽丹/本息/失苹果酰肼/二羟基哒嗪/Maleic Hydrazide 质量规格：含量测定 包装;1g
贝尔格莱德病毒型PCR检测试剂盒说明书Aerococcus│viridans 中文名称：绿色气球菌种属:Aerococcus│viridans分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物模式菌株:no培养方法培养基:33生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：>98.0%(HPLC)

Rhizobium│huautlense 中文名称：华特拉根瘤菌种属:Rhizobium│huautlense分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:476生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：>98.0%(HPLC)

Deinococcus│radiodurans 中文名称：耐辐射异常球菌种属:Deinococcus│radiodurans提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no应用领域:教学科研，探讨磷酸戊糖途径与DNA辐射损伤修复机制的关系。培养方法培养基:33生长条件:30℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法 纯度：98%

Bacillus│malacitensis 中文名称：马拉加芽孢杆菌种属:Bacillus│malacitensis分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:33生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：98%

Brevibacterium│halotolerans 中文名称：耐盐短杆菌种属:Brevibacterium│halotolerans分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:33生长条件:20-35℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：98%

Arthrobacter│scleromae 中文名称：硬结节杆菌种属:Arthrobacter│scleromae分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:33生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：98%

Pseudomonas│congelans 中文名称：结冰假单胞菌种属:Pseudomonas│congelans分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:33生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：>97.0%(GC)

Serratia│plymuthica 中文名称：普利茅斯沙雷氏菌种属:Serratia│plymuthica分离基物:土壤样品提供形式:斜面培养物安全等级:1模式菌株:no培养方法培养基:33生长条件:20℃存储条件:-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法 纯度：>97.0%(GC)