PCR技术的定量原理：
扩增曲线
在Real- qPCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号，随着反应的进行，监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线，即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。
在Real-time qPCR扩增早期，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化，此时即为基线期。
PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数形式增加的，随着反应循环数的增加，终PCR反应不再以指数形式生成模板，从而进入“平台期”。在该时期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系，所以根据终的PCR产物量不能计算出初始模板量。
荧光染料的优点：
产品仅用于科研使用简便；
可以与任何PCR产物结合；
价格便宜；
荧光染料的缺点：
不能区分不同的双链DNA
引物二聚体会影响检测的敏感性
非特异性产物会影响结果的敏感性
引物二聚体和非特异性扩增问题可以通过熔解曲线 (Melting curve) 进行识别，进而通过PCR引物的设计和反应条件的优化得以解决。总的来说，SYBR Green I方法是一种基础也的Real-time qPCR实验手段。 产品名称 | 军团菌属通用探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Legionella spp. | 货号 | YSP96875 |
荧光探针：
Real-e qPCR中的荧光探针为TaqMan探针，其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针，该探针的5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团。
正常情况下两个基团的空间距离很近，荧光基因因淬灭而不能发出荧光。PCR扩增时，引物与该探针同时结合到模板上，探针的结合位置位于上下游引物之间。
当扩增延伸到探针结合的位置时，Taq酶利用5'外切酶活性，将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比，因此，根据PCR反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。
TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题，反应结束后无需通过熔解曲线检测，缩短了实验时间。
TaqMan探针技术的优点：
荧光背景低；
敏感性高；
杂交稳定性高；
荧光光谱分辨率好；
特异性高。
TaqMan探针技术的缺点：
成本高；
设计难度大；
只能用于检测产物长度低于150bp的反应。
由于TaqMan探针的高特异性，可用于等位基因的辨别，特别适用于人类基因多态性以及根据SNP区别和定量菌株。
荧光定量PCR原理：
产品仅用于科研荧光定量PCR早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。
一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
苄氧基甲(>98.0%(GC))5--8-喹啉
溴甲(>97.0%(GC))8-溴-5-喹啉 甲(>98.0%(GC))叔丁氧羰基氨基哌啶-1,二羧酸-1-苄酯 羟基甲(>98.0%(GC)(T))溴 -6,7-二甲氧基喹啉 4'-基酮(>95.0%(GC))溴-6-氨基喹啉 基联(>97.0%(GC))溴-6-甲氧基喹啉 基苄(>97.0%(GC)(T))溴-6-喹啉 (反-基环己基)甲(>98.0%(GC))溴-7-甲氧基喹啉 氟甲(>99.0%(GC))溴-7-喹啉 基-4'-羟基联(>98.0%(GC))溴-7-羟基喹啉 庚基甲(>98.0%(GC))溴-8-甲氧基喹啉 (反-基环己基)(>98.0%(GC))溴-8-喹啉 对(>98.0%(GC))溴-8-羟基喹啉 1-溴-正辛基(>99.0%(GC)(T))溴吡啶-2-甲酸酯 丁基环己烷甲酸 (顺反混合物)(>98.0%(GC)(T))溴吡啶-2-甲酰 甲基环己甲酸(顺反异构体混和物)(>98.0%(GC)(T))溴靛红酸酐 反-甲基环己甲酸)(>98.0%(GC)(T))溴基四氢吡喃 反-基环己甲酸(>98.0%(T)(GC))7--羟基喹啉-羧酸
军团菌属通用探针法荧光PCR检测试剂盒多巴D1受体相互作用蛋白抗体Phospho-LKB1 (Thr189) /FITC 荧光素标记酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体IgG100 ul Capicua蛋白抗体LN /FITC 荧光素标记层粘连蛋白抗体IgG20 ul 碳酸酐酶6抗体Ingrin alpha 4,beta 7(LPAM-1)/FITC 荧光素标记整合素α4β7抗体IgG100 ul 间隙连接蛋白29抗体HRH3/GPCR97/FITC 荧光素标记组织H3受体抗体IgG100 ul 间隙连接蛋白29抗体HRH4/GPCR105/FITC 荧光素标记组织H4受体抗体IgG100 ul 细胞表面趋化因子受体7抗体LOX-1/OLR1/FITC 荧光素标记凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体抗体IgG100 ul 神经母细胞瘤源性分泌蛋白抗体Lpin1 proin/FITC 荧光素标记Lpin1 抗体IgG100 ul 染色质修饰蛋白2B抗体Lpin1 proin/FITC 荧光素标记Lpin1 抗体IgG20 ul 细胞骨架相关蛋白1/微管蛋白折叠辅助因子B抗体LPL/FITC 荧光素标记脂蛋白脂酶抗体IgG100 ul |
