PCR技术的定量原理: 扩增曲线 在Real- qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real-time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化,此时即为基线期。 PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数形式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数形式生成模板,从而进入“平台期”。在该时期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系,所以根据终的PCR产物量不能计算出初始模板量。 荧光染料的优点: 产品仅用于科研使用简便; 可以与任何PCR产物结合; 价格便宜; 荧光染料的缺点: 不能区分不同的双链DNA 引物二聚体会影响检测的敏感性 非特异性产物会影响结果的敏感性 引物二聚体和非特异性扩增问题可以通过熔解曲线 (Melting curve) 进行识别,进而通过PCR引物的设计和反应条件的优化得以解决。总的来说,SYBR Green I方法是一种基础也的Real-time qPCR实验手段。 产品名称 | 滑液支原体探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Mycoplasma synoviae | 货号 | YSP96988 |
荧光探针: Real-e qPCR中的荧光探针为TaqMan探针,其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针,该探针的5'端标记荧光基团,3'端标记淬灭基团。 正常情况下两个基团的空间距离很近,荧光基因因淬灭而不能发出荧光。PCR扩增时,引物与该探针同时结合到模板上,探针的结合位置位于上下游引物之间。 当扩增延伸到探针结合的位置时,Taq酶利用5'外切酶活性,将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来,从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比,因此,根据PCR反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。 TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题,反应结束后无需通过熔解曲线检测,缩短了实验时间。 TaqMan探针技术的优点: 荧光背景低; 敏感性高; 杂交稳定性高; 荧光光谱分辨率好; 特异性高。 TaqMan探针技术的缺点: 成本高; 设计难度大; 只能用于检测产物长度低于150bp的反应。 由于TaqMan探针的高特异性,可用于等位基因的辨别,特别适用于人类基因多态性以及根据SNP区别和定量菌株。
荧光定量PCR原理: 产品仅用于科研荧光定量PCR早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。 特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途! ATP2c1 英文名称: 钙离子ATP酶通道蛋白抗体 0.2ml
Anti-TNF-alpha 坏死因子-α抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml GATA4 ELISA Kit muman 人GATA结合蛋白4 ELISA试剂盒Multi-class antibodies规格: 96T Anti-STAT1 信号转导与转录激活因子1抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的羊抗人IgG 规格 0.1ml iNOS(Mouse inducible nitric oxide synthase) ELISA Kit 小鼠诱导型一氧化氮合成酶 96T NDUFS3 英文名称: 线粒体复合物NDUFS3蛋白抗体 0.2ml C15orf52 英文名称: 15号染色体开放阅读框52抗体 0.2ml Anti-IL-2 白细胞介素-2单克隆抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml bFGF(Human basic fibroblast growth factor) ELISA Kit 人碱性成纤维细胞生长因子Multi-class antibodies规格: 48T Dicaffeoylquinic acid32451-88-020mgHPLC≥98% 异牡荆苷;异牡荆素;皂草素,皂草黄素,石碱草素,异牡荆黄素Isovitexin29702-25-820mgHPLC≥98% 异欧前胡素;白芷甲素?、异欧芹属素乙Isoimperatorin482-45-120mgHPLC≥98% 异嗪皮啶;异秦皮啶Isofraxidin486-21-520mgHPLC≥98% 异去氢钩藤碱;异柯诺辛因碱Isocorynoxeine51014-29-020mgHPLC≥98% 大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat Inhibin binding protein,INHBP ELISA Kit 大鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat Helicobacter pylori IgG,Hp-IgG ELISA Kit 大鼠游离β绒毛膜促性腺激素(f-βCG)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat free chorionic gonadotropin,f-βCG ELISA Kit 大鼠游离睾酮(F-TESTO)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit 大鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat Free Anti-G-CSFR 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子3受体抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的小鼠抗豚鼠IgG 规格 0.1ml ANG-2(Human Angiopoietin 2) ELISA Kit 人血管生成素2 96T phospho-c-Raf(Ser296) 英文名称: 酸化原癌基因c-Raf抗体 0.1ml 细胞角蛋白 18 单克隆抗体Cytokeratin 18 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 细胞角蛋白 18 单克隆抗体Cytokeratin 18 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 组蛋白H3 (Mono Methyl Lys79) 单克隆抗体(1C2)Histone H3 (Mono Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(1C2)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 组蛋白H3 (Mono Methyl Lys79) 单克隆抗体(1E10)Histone H3 (Mono Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(1E10)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 组蛋白H3 (Tri Methyl Lys9) 单克隆抗体(2C3)Histone H3 (Tri Methyl Lys9) Monoclonal Antibody(2C3)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 组蛋白H3 (Di Methyl Lys27) 单克隆抗体(3B12)Histone H3 (Di Methyl Lys27) Monoclonal Antibody(3B12)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 滑液支原体探针法荧光PCR检测试剂盒Ⅱ型胶原α1蛋白/软骨钙素抗体RARRES1/TIG1/FITC 荧光素标记视黄酸受体应答蛋白1抗体IgG100 ul 皮质素1抗体TIGAR humen/FITC 荧光素标记兔抗TIGAR蛋白抗体IgG100 ul 8号染色体开放阅读框70抗体Rarres2/TIG2/FITC 荧光素标记视黄酸受体应答蛋白2抗体IgG100 ul 胰羧肽酶E抗体Rarres3/TIG3/Chemerin/FITC 荧光素标记视黄酸受体应答蛋白3抗体IgG20 ul 酸化细胞角蛋白18抗体rInsulin /HRP 辣根过氧化物酶标记抗重组胰岛素抗体IgG100 ug 20号染色体开放阅读框112抗体rInsulin /FITC 荧光素标记抗重组胰岛素抗体IgG100 ul 10号染色体开放阅读框88抗体rInsulin human monoclonal/FITC 荧光素标记重组胰岛素单克隆抗体IgG100 ul 富含半胱氨酸C端蛋白1抗体rInsulin monoclonal (pig)/FITC 荧光素标记抗胰岛素单克隆抗体(猪)IgG200 ul E1A激活基因刺激蛋白2抗体TIMP-1/FITC 荧光素标记金属蛋白酶组织抑制因子-1抗体IgG100 ul |