样品RNA的抽提: ①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 产品名称 | 畸形*线虫探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Nematodirus abnormalis | 货号 | YSP96997 |
实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 荧光定量PCR试剂盒技术: 本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 Phospho-Aurora B(Tyr12) 英文名称: 酸化有丝分裂激酶B抗体 0.1ml Anti-CCL3/MIP-1 Alpha/FITC 荧光素标记巨噬细胞炎性蛋白1α抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml SP-R(Mouse substance P receptor) ELISA Kit 小鼠P物质受体Multi-class antibodies规格: 48T Anti-CD68/FITC 荧光素标记CD68抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml Rhesus antibody Rh DPP2 溶酶体丝氨酸蛋白酶DPP2抗体 规格 0.1ml RV IgM 风疹胞病毒 IgM(间接法二步法) MRC2 英文名称: 巨噬细胞甘露糖受体2抗体 0.1ml C17orf57 英文名称: 17号染色体开放阅读框57抗体 0.2ml Anti-Orexin-A 增食欲素-A/欲激素AMulti-class antibodies规格: 0.1ml CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme) ELISA Kit 人肌酸激酶同工酶MBMulti-class antibodies规格: 48T Anti-OCT2 阳离子转运蛋白2抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml Rhesus antibody Rh IDH3A 草酰琥珀酸脱羧酶α抗体 规格 0.2ml OxLDL ELISA Kit 大鼠氧化低密度脂蛋白 96T inhibin B,INH-B ELISA Kit 大鼠白三烯E4(LTE4)运输,-20℃保存50T 人Cosmc基因PCR检测试剂盒低温运输,-20℃保存50T 人 NK 细胞分离液1.062Cell Separation Solution-20℃保存200 mL 热启动Tth DNA聚合酶250U 热启动Taq DNA聚合酶Hot Start Taq DNA Polymerase-20℃保存100U 热敏磷酸酶Antarctic Phosphatase-20℃保存500U 犬英文名称: Rat Apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit 大鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat Apolipoprotein H,Apo-H ELISA Kit 大鼠正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted,RANTES ELISA Kit 大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit 大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA Kit 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit 大鼠脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒 进口/原装 英文名称: Rat lipolysaccharide binding protein,LBP ELISA Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 存活素 单克隆抗体Survivin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 环腺苷酸反应元件结合蛋白-1 单克隆抗体CREB-1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 泛甲基化赖氨酸 单克隆抗体(Mix)Pan Methylated Lysine Monoclonal Antibody(Mix)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul MICU1 单克隆抗体MICU1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 畸形*线虫探针法荧光PCR检测试剂盒表皮生长因子样蛋白2抗体TRPM2 /FITC 荧光素标记瞬时受体电位离子通道蛋白抗体(M亚家族)IgG100 ul 脊索生成素样蛋白1抗体TRP1/gp75 /FITC 荧光素标记酪氨酸酶相关蛋白1抗体IgG100 ul 神经诱导胚胎发育相关蛋白Churchill抗体TRP2/FITC 荧光素标记酪氨酸酶相关蛋白2抗体IgG100 ul 二氢嘧啶酶相关蛋白3抗体Trx/FITC 荧光素标记硫氧还蛋白抗体IgG100 ul 转录激活蛋白CRSP9抗体TSARG3/FITC 荧光素标记生精细胞凋亡相关基因3抗体IgG100 ul 神经网蛋白CopineVI抗体TSARG4/FITC 荧光素标记生精细胞凋亡相关基因4抗体IgG20 ul 脑型肉棕榈酰转移酶1C抗体TSARG6/FITC 荧光素标记生精细胞凋亡相关基因6抗体IgG100µl 补体因子B抗体TSARG7/FITC 荧光素标记发生相关的新基因抗体IgG100 ul 酰胆受体前体蛋白AChRα1抗体TSFP1/SP1 /FITC 荧光素标记SP1转录生长因子抗体IgG100 ul |