293 HEK-293 (胚肾细胞)说明书

产品属性：

产品名称：293 [HEK-293] (胚肾细胞)

规格：1×10⁶cells/T25培养瓶

生长培养基：MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

名称293 [HEK-293] (人胚肾细胞) (STR鉴定正确)

别称Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Human Embryonic Kidney 293

背景描述293 [HEK-293]细胞是剪切过的人腺病毒5(Ad5)转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞，293 [HEK-293]细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出，293 [HEK-293]细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA，但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现，Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入293 [HEK-293]细胞19号染色体(19q13.2)。293 [HEK-293]细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主，可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体，由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。

种属人

年龄（性别）胚胎

组织来源肾；以腺病毒5DNA进行转化

生长特性贴壁细胞

细胞形态上皮细胞样

细胞类型转化细胞系

生物安全等级2

生长培养基MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例1:3-1:4

推荐换液频率2~3次/周

倍增时间~24-30 hours

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO₂，5%

温度：37℃

致瘤性Yes, forms tumors in nude mice.

受体表达情况vitronectin

注意事项该细胞贴壁松散，操作时请尽量轻柔；换液时需预热培养基；收货如有大块脱落的细胞团，为正常现象，请按照收货注意事项处理。

冷冻保存细胞之方法？

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

小鼠β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

人Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)elisa检测试剂盒    用途：仅供科研

人Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP)elisa检测试剂盒    用途：仅供科研

小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

人Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)elisa检测试剂盒    用途：仅供科研

人转酶2C多肽(TGM2)elisa检测试剂盒    用途：仅供科研

小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

人粘蛋白/粘液素7(MUC7)elisa检测试剂盒    用途：仅供科研

小鼠体(TR)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠抗TR)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠P)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠前心钠肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠FⅩ)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠Ⅸ)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠g)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠大内皮素(BigET)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠白介素27(IL-27)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

小鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒    用途：仅供科研

人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒    Human cutaneous T cell-attracting chemokine, CTACK Elisa Kit    96T/48T

人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA试剂盒    Human Breast and kidney expressed chemokine, BRAK Elisa Kit    96T/48T

人B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA试剂盒     Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1, BLC-1 Elisa Kit    96T/48T

人结缔组织活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA试剂盒     Human connective tissue-activating peptide Ⅲ, CTAPⅢ Elisa Kit    96T/48T

a Kit    96T/48T

Fc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA试剂盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E, FcεRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA试剂盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ G Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA试剂盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA试剂盒     Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA试剂盒     Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ  Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA试剂盒     Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit    96T/48T

G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA试剂盒     Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit     96T/48T

人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒    Human granulocyte chemotactic protein-2, GCP-2 Elisa Kit     96T/48T

人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA试剂盒     Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1, GlyCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

人干扰素调节因子(IRF)ELISA试剂盒     Human interferon Regulatory Factor, IRF Elisa Kit    96T/48T

人淋巴毒素β(LTB)ELISA试剂盒     Human lymphotoxinβ, LTB Elisa Kit    96T/48T

人淋巴毒素α(LTA)ELISA试剂盒     Human lymphotoxinα, LTA Elisa Kit    96T/48T

人CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒    Human CC-chemokine receptor 1, CCR1 Elisa Kit    96T/48T

293 [HEK-293] (胚肾细胞)说明书人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA试剂盒    Human CX3C-chemokine receptor 1, CX3CR1 Elisa Kit    96T/48T

人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒     Human pulmonary activation regulated chemokine, PARC Elisa Kit    96T/48T

人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA试剂盒    Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1, MAdCAM-1 Elisa Kit    96T/48T

人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒    Human Interferon β, IFN-β/IFNB Elisa Kit     96T/48T

人可溶性CD38(sCD38)ELISA试剂盒    Human Soluble Cluster of differentiation 38, sCD38 Elisa Kit    96T/48T

培养操作:

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。