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产品名称 | 规格 | 货号 | 293 [HEK-293] (胚肾细胞)说明书 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 | YS-01X6321 |
产品名称:293 [HEK-293] (胚肾细胞)
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶 生长培养基:MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S 名称293 [HEK-293] (人胚肾细胞) (STR鉴定正确) 别称Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Human Embryonic Kidney 293 背景描述293 [HEK-293]细胞是剪切过的人腺病毒5(Ad5)转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞,293 [HEK-293]细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出,293 [HEK-293]细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA,但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现,Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入293 [HEK-293]细胞19号染色体(19q13.2)。293 [HEK-293]细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主,可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体,由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。 种属人 年龄(性别)胚胎 组织来源肾;以腺病毒5DNA进行转化 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 细胞类型转化细胞系 生物安全等级2 生长培养基MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S 推荐传代比例1:3-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~24-30 hours 冻存条件 冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮 培养条件 气相:空气,95%;CO₂,5% 温度:37℃ 致瘤性Yes, forms tumors in nude mice. 受体表达情况vitronectin 注意事项该细胞贴壁松散,操作时请尽量轻柔;换液时需预热培养基;收货如有大块脱落的细胞团,为正常现象,请按照收货注意事项处理。

冷冻保存细胞之方法? 冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。 冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验要点及说明: 1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 小鼠β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 人Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)elisa检测试剂盒 用途:仅供科研 人Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP)elisa检测试剂盒 用途:仅供科研 小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 人Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)elisa检测试剂盒 用途:仅供科研 人转酶2C多肽(TGM2)elisa检测试剂盒 用途:仅供科研 小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 人粘蛋白/粘液素7(MUC7)elisa检测试剂盒 用途:仅供科研 小鼠体(TR)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠抗TR)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠P)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠前心钠肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠FⅩ)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠Ⅸ)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠g)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠大内皮素(BigET)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠白介素27(IL-27)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 小鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒 用途:仅供科研 人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒 Human cutaneous T cell-attracting chemokine, CTACK Elisa Kit 96T/48T 人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA试剂盒 Human Breast and kidney expressed chemokine, BRAK Elisa Kit 96T/48T 人B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA试剂盒 Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1, BLC-1 Elisa Kit 96T/48T 人结缔组织活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA试剂盒 Human connective tissue-activating peptide Ⅲ, CTAPⅢ Elisa Kit 96T/48T a Kit 96T/48T Fc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E, FcεRⅡ Elisa Kit 96T/48T G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ G Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit 96T/48T G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit 96T/48T G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅢ Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅡ Elisa Kit 96T/48T G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA试剂盒 Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G, FcγRⅠ Elisa Kit 96T/48T 人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒 Human granulocyte chemotactic protein-2, GCP-2 Elisa Kit 96T/48T 人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA试剂盒 Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1, GlyCAM-1 Elisa Kit 96T/48T 人干扰素调节因子(IRF)ELISA试剂盒 Human interferon Regulatory Factor, IRF Elisa Kit 96T/48T 人淋巴毒素β(LTB)ELISA试剂盒 Human lymphotoxinβ, LTB Elisa Kit 96T/48T 人淋巴毒素α(LTA)ELISA试剂盒 Human lymphotoxinα, LTA Elisa Kit 96T/48T 人CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒 Human CC-chemokine receptor 1, CCR1 Elisa Kit 96T/48T 293 [HEK-293] (胚肾细胞)说明书人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA试剂盒 Human CX3C-chemokine receptor 1, CX3CR1 Elisa Kit 96T/48T 人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒 Human pulmonary activation regulated chemokine, PARC Elisa Kit 96T/48T 人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA试剂盒 Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1, MAdCAM-1 Elisa Kit 96T/48T 人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒 Human Interferon β, IFN-β/IFNB Elisa Kit 96T/48T 人可溶性CD38(sCD38)ELISA试剂盒 Human Soluble Cluster of differentiation 38, sCD38 Elisa Kit 96T/48T 培养操作: 1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。 1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。 2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。 3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。 4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。 3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类; 1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。 3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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