IBL elisa试剂盒利用的是夹心法。包被孔内包被了抗原,用对人IgM有特异性的酶标抗体来检测样品中的特异性抗体。底物反应后,所显示的颜色的强度与检测到的IgM特异性抗体的量正比。样品的结果可直接用标准曲线获得。
IBL elisa试剂盒的实验步骤:
(1)加100µL标准品和已稀释样本于相应反应孔中,在定性检测中只使用标准品B。
(2)封板后室温(18℃-25℃)温育60分钟。
(3)移去粘性金属板,弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次,在吸水纸上拍干。
(4)在每一微孔中加入100µL酶联物。
(5)封板后室温(18℃-25℃)温育30分钟。
(6)移去粘性金属板,弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次,在吸水纸上拍干。加底物液和终止液时,如果有条件的话,可使用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气泡产生。
(7)每孔加TMB底物液100µL。
(8)室温(18℃-25℃)避光温育20分钟。
(9)在每一微孔中加入100µLTMB终止液以终止底物反应。轻轻摇动包被板以使试剂混合均匀。此时,颜色蓝色变成黄色。
(10)加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。
IBL elisa试剂盒的结果计算:
在半对数坐标纸上或用自动生成的方法,以标准品的OD值为Y轴,浓度为X轴,绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。