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人白介素23ELISA试剂盒实验原理与操作方法

点击次数:1635 更新时间:2011-01-05
 

实验原理

人白介素23ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素23(IL-23)水平。用纯化的人白介素23(IL-23)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素23(IL-23),再与HRP标记的白介素23(IL-23)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素23(IL-23)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白介素23(IL-23)浓度。

操作方法

1.标准品的稀释:人白介素23ELISA试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

5000ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
2500 ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
1250 ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
625 ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
312.5 ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

 
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