结合羊驼肾细胞（含原代和永生化细胞系）特性，标准无菌传代操作步骤如下，全程需在超净台内完成：
1. 操作前准备
提前将培养基、PBS、放入37℃水浴预温30分钟，超净台紫外线消毒30分钟后通风5分钟，用75%酒精消毒所有试剂瓶外壁后放入超净台。
2. 细胞预处理
取出培养瓶，吸走旧培养基，用3~5mL预温PBS轻轻冲洗细胞层1~2次，去除残留血清和死细胞，吸走PBS。
3. 消化处理
加入适量0.25%EDTA（T25培养瓶加1mL，T75加2mL），轻轻晃动培养瓶使均匀覆盖细胞，放入37℃培养箱孵育：
永生化细胞系：1~2分钟
原代细胞：1~1.5分钟
取出后显微镜下观察，80%细胞回缩变圆、即将脱落时，立即加入2倍体积含血清的培养基终止消化。
4. 收集与离心
轻轻吹打培养瓶壁3~5次，使细胞脱落，将细胞悬液转移到15mL离心管，1000rpm室温离心5分钟，弃上清保留细胞沉淀。
5. 重悬接种
用新鲜培养基轻轻重悬细胞沉淀，按照对应比例分装到新培养瓶：
永生化细胞系：1:2~1:3传代
原代细胞：不超过1:2传代
轻轻晃动培养瓶使细胞均匀分布，标注细胞名称、传代时间和代次。
6. 培养观察
放入37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱，24小时后观察细胞贴壁情况，之后每2~3天更换一次新鲜培养基，等待细胞再次长满即可继续传代。
关键注意事项
原代差速纯化时，第一次消化仅去除贴壁快的成纤维细胞，1~1.5分钟后吸出消化液终止，保留瓶内未脱落的肾上皮细胞继续培养，可逐步提升细胞纯度。
