原代小鼠神经元的分离常用于神经系统发育、药物作用机制等研究。由于神经元属于高度分化且脆弱的细胞类型，其分离过程中的组织消化环节直接影响最终细胞的存活率、纯度和功能状态。不当的消化方式会导致细胞碎片增多、活力下降甚至失败。
原代小鼠神经元分离消化的关键在于精准控制酶解时间和温度，分享几个实用技巧：
一、消化前准备
组织处理：取材后立即用Hanks溶液冲洗2-3次，去除血液残留。用锋利的剪刀将成0.5mm×1mm小块，避免机械损伤。
酶的选择：白酶（0.25%）适合快速消化，胶原酶（1mg/ml）更适合神经元等软组织。木瓜蛋白酶+DNA酶组合能有效分离神经元。
二、消化过程控制
时间与温度：37℃消化10-20分钟（皮层/海马神经元）或30-60分钟（小胶质细胞）。用显微镜观察，细胞分散后立即终止消化。
终止消化：加入等体积含血清的培养基中和酶活性。
三、细胞分离与纯化
过滤：先用100μm筛网去除大块组织，再用20μm筛网过滤。
离心：500转/分钟离心5分钟，弃上清。
纯化：免疫磁珠分离或流式细胞术可进一步提高纯度。
四、注意事项
无菌操作：全程酒精消毒，避免污染。
温度控制：消化过程保持37℃恒温。
纯度鉴定：用B-Tubulin-ll免疫荧光染色，纯度可达90%以上。
