一、移液操作要精准
校准移液器：定期用电子天平校准，确保加样体积准确，减少人为误差。
预润湿吸头：加样前用洗涤液润湿吸头，避免气泡干扰，提升重复性。
练习加样速度：在空白板上练习快速加样，缩短加样时间差，减少孔间差异。
二、洗板步骤要规范
使用洗板机：自动洗板能保证每孔洗涤时间和力度一致，降低CV值。
手工洗板注意：若手动操作，确保每孔洗涤时间、力度相同，避免残留不均。
三、ELISA试剂盒与样本处理
平衡至室温：所有试剂和样本使用前室温平衡30分钟，减少温度差异影响。
样本稀释优化：低浓度样本适当稀释，提高信噪比，减少背景干扰。
四、实验设计优化
设置复孔：每个样本做3-5个复孔，取平均值，降低单次测量误差。
预实验验证：通过棋盘滴定法优化抗体浓度，选择OD值接近1.2且背景的组合。
五、设备与质控
校准酶标仪：定期校准，确保读数准确，避免设备误差。
设置质控孔：每板加阴阳性对照，批内CV应<10%，批间CV<15%。
六、其他注意事项
避免交叉污染：使用一次性吸头和封板膜，防止孔间污染。
样本处理：冻融样本充分混匀，浑浊样本离心或过滤后检测。
