ELISA空白孔的OD值（吸光度）是衡量实验背景信号的关键指标，其正常范围因检测方法不同而有所差异：
夹心法：空白孔OD值应 <0.2，部分严格标准要求 ≤0.1。
间接法：通常要求空白孔OD值 <0.1。
若空白值超出上述范围，可能提示洗涤不、试剂污染或非特异性结合等问题，需优化实验条件。（续写部分）
当空白孔OD值异常升高时，建议通过以下步骤进行排查与优化：
1. 洗涤环节强化
• 增加洗涤缓冲液浸泡时间至30秒/次
• 采用磁珠辅助洗涤可降低非特异性吸附
• 检查洗板机喷嘴是否堵塞，确保每孔洗涤量≥300μL
2. 试剂质量控制
• 新鲜配制封闭液（建议现用现配1%BSA-PBS）
• 检测蒸馏水电阻值应≥18.2MΩ
• 酶标二抗需离心去除聚合体后再稀释使用
3. 环境因素控制
• 实验全程佩戴无粉手套
• 使用预冷板架防止试剂蒸发浓缩
• 显色反应时避光孵育，避免强光直射
4. 特殊案例处理
对于化学发光ELISA，建议：
- 将底物平衡至室温后使用
- 加入终止液后10分钟内完成读数
- 采用惰性塑料材质的黑色微孔板
常见误区纠正：
× 单纯增加封闭时间（超过2小时可能适得其反）
× 使用含NaN3的缓冲液（会抑制HRP活性）
× 不同批次板条混用（边缘效应差异可达15%）
数据记录建议：
建立空白孔历史数据库，记录：
- 当日温湿度
- 酶标仪光路校准日期
- 洗板机压力参数
- 试剂批号信息
通过建立上述标准化操作流程，可使空白孔OD值稳定在0.08±0.02的理想区间。对于高背景值样本检测，可尝试在封闭液中加入0.05% Tween-20，但需注意可能影响低丰度靶标检出率。定期进行微孔板表面接触角测试（应保持55°-65°），可有效预防疏水效应导致的非特异性结合。
