如何避免PCR产物的反复冻融

     避免PCR产物反复冻融，有效的方法是‌按单次使用量分装保存‌。将PCR产物分装到低吸附离心管中，每管预留10%体积，标记好日期和浓度，采用“先存先用"原则。这样每次只需取用所需量，避免反复冻融整个样本。

‌其他关键措施包括：‌

‌添加保护剂‌：在PCR产物中加入5%-10%甘油或0.1mM EDTA，能缓冲冻融过程中的物理损伤并抑制核酸酶活性。

‌优化保存温度‌：短期存放（1-2天内）可置于4℃；长期保存（数月）应置于-80℃。若需频繁使用，可短期存放于4℃（不超过72小时）。

‌严格质量控制‌：每次冻融后建议通过电泳检测完整性，若出现条带弥散或OD260/280比值异常（>1.9），需重新扩增样本。