OD值在ELISA中的作用
OD值（光密度值）是ELISA检测中通过酶标仪测定的吸光度指标，直接反映样本中目标物质的含量。其核心作用包括：
定量分析基础：OD值与目标物浓度呈正相关，浓度越高，OD值越大。
结果判读依据：通过对比样品OD值与临界值（如S/CO值）判断阴阳性。
标准曲线计算：标准曲线将OD值转换为具体浓度，需通过四参数逻辑斯蒂等模型拟合。
影响ELISA OD值的常见因素
样本处理
样本收集、保存不当（如反复冻融）可能影响待测物稳定性。
溶血、脂浊、类风湿因子等干扰物质会导致假阳性或假阴性。
试剂质量
抗体特异性、亲和力不足会降低灵敏度或导致假阳性。
酶底物系统配制错误或保存不当会显色异常。
操作技术
加样准确性：未校准的移液器或加样速度不一致导致孔间体积差异。
洗涤技术：洗涤不导致背景偏高，或过度洗涤破坏抗原-抗体结合。
孵育条件：温度波动、时间不足或未使用封板膜影响反应效率。
仪器与环境
酶标仪未校准或波长错误（如未使用450nm）导致读数偏差。
阳光直射、温度波动等环境因素干扰显色反应。
标准曲线优化
标准品溶解不充分、稀释未混匀或加样不精确导致曲线拟合度差（R²<0.99）。
优化OD值读数的关键措施
严格操作规范
加样时保持垂直，避免气泡，定期校准移液器。
洗涤4-5次，每孔250μL，拍干而非过度拍打。
质量控制
使用空白孔和阴性对照监控背景信号。
分批操作减少操作时差，避免显色时间不足或过长。
样本与试剂优化
避免溶血样本，必要时测定血红蛋白含量（≤5g/L）。
选择高灵敏度试剂盒，确保抗体稀释正确。
