PCR核酸检测试剂盒的检验原理:
PCR核酸检测试剂盒选取EB病毒基因组BamH1W基因设计特异性引物和探针,在样本DNA核酸纯化之后采用荧光PCR对病毒DNA进行检测。
PCR核酸检测试剂盒采用煮沸裂解法提取病毒DNA模板,然后在Taq酶的作用下对
靶区域进行扩增,同时利用Taqman荧光探针技术实时监测扩增产物的累积。Taqman探针带有一个荧光发光基团和一个荧光淬灭基团,完整的探针在特定光源激发下,发光基团所产生的荧光被淬灭基团全部吸收,样品无荧光。PCR过程中,Taq酶在延伸DNA链的同时,可通过自身的5’→3’核酸外切酶活性降解与模板结合的特异性荧光探针,使荧光报告基团与淬灭基团分离,分离后的荧光报告基团在特定光源激发下产生荧光。通过监测整个PCR过程荧光信号的变化,对未知模板进行定性分析。
同时PCR核酸检测试剂盒采用内标质控体系,用于监测反应体系可能存在的抑制因素。内标模板与靶基因无同源性,内标探针选择的是与靶基因探针没有冲突的另一检测通道。
注:1)不同批号试剂盒中各组分不可以互换。
2)PCR核酸检测试剂盒以外必需的设备及材料:试剂盒以外必需的设备及材料:荧光定量PCR仪、旋涡混合器、生物安全柜、迷你离心机、干式恒温仪或水浴锅、移液器及无菌吸头、离心机及无菌离心管、PCR反应管、无粉乳胶手套。