elisa酶联免疫试剂盒样品的稀释检测范围
1.根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀。BCA工作液室温下24小时内稳定。
2.*溶解蛋白标准品,取C液10微升稀释至100微升,使终浓度为0.5mg/mL。原则上,蛋白样品在什么溶液中,标准品应用什么溶液稀释。但我们强烈建议使用三蒸水稀释标准品及样品。
3.标准品的稀释:标准曲线的浓度范围应在20-2000μg/mL之间。建议使用倍比稀释法;建议取4~6个不同的浓度做标准曲线;建议每个浓度做2~3个复孔。
4.蛋白样品的稀释:将待测蛋白样品稀释到标准曲线所能检测的范围内。在eppendorf管中对待测蛋白进行稀释,混匀。可用溶解蛋白的液体进行稀释,但我们建议使用三蒸水稀释标准品。
5.在96孔板各孔中加入200μLBCA工作液,再在每孔中分别加入已稀释好的标准品和蛋白样品各20μL,建议标准品做2~3个复孔。37℃放置30分钟。
6.测定A562nm处的吸光度值,540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。
elisa酶联免疫试剂盒的实验质量控制
(1)确定控制的对象;
(2)规定控制对象的标准(预期值);
(3)制定或选择控制方法和手段;
(4)测量实际数据;
(5)比较或较对实际数据与预期值之间的差异,并说明产生这一差异的原因。超出预定误差范围,报警系发出信号,反馈通道中断。
(6)采取行动,解决差异。恢复原状(原标准状态)的手段发挥作用。质量控制主要采用质控图进行。质控图是把某一检验的性能数据与所计算出来的预期的"控制限"进行比较的图。这种性能数据是在按规程正常进行时,按时间顺序而抽选出来的,其目的是检测检验过程中变异的"可追查"性原因。"可追逆"性的误差原因,是指除去随机误差以外的其他原因。"控制限"是通过统计计算出来的。