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免疫组织化学技术染色注意事项

点击次数:1009 更新时间:2015-07-02
 

注意事项

(1)免疫荧光法zui适宜进行冰冻切片的染色,因为此种切片一般抗原保存得较好。若是石蜡切片则应首先选用免疫酶法等染色技术。

(2)使用商品的荧光标记抗体,在进行染色前应作抗体效价的测定,找出合适的稀释度后再进行成批染色。一般而言,在阳性物质发出明亮荧光而背景又较暗时的稀释度是较为合适的。高稀释度的荧光抗体可以减少非特异性着色使染色结果更具特异性,但稀释度过高会导致假阴性的出现。低稀释度的荧光抗体使结果较易观察,但会带来非特异性的着色,甚至出现假阳性的结果。

(3)非特异荧光的消除。非特异性荧光的消除方法较多。一般而言,冰冻切片的非特异性荧光较强,石蜡切片的非特异性荧光较弱。常用的方法有①先用非免疫血清如10%牛血清等处理切片,然后再行荧光染色。②用小鼠相应组织的干粉吸收荧光抗体中的非特异性成分。③选择合适的稀释度和切片。④选用高特异性和价的荧光抗体。

(4)洗涤要*。每道程序都有用蒸馏水或缓冲液洗涤以清除残留在切片中的 试剂,以达到特异着色的目的。洗涤时不论是冲洗还是振荡洗涤,其基本原则是要达到洗涤干净的目的,或者说充分稀释上一道程序中的 试剂 ,使其含量降至zui低。一般只要有足够的时间,以静置廷长每次洗涤时间为宜,这是防止脱片的较好办法。洗涤液的PH值应为7.2~7.4之间,过高过低的不利于染色过程,尤其是在偏碱的PH值条件下。

(5)孵育时间与温度。免疫荧光法一般孵育温度在37℃,时间为20——30分钟时是*时间与温度。当然,也与抗体的效价,组织抗原的含量与部位,切片的厚度等有关。

英文名称 Homo sapiens (Human) 葡萄糖转运蛋白14(GLUT14)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 葡萄糖转运蛋白12(GLUT12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 葡萄糖转运蛋白11(GLUT11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 葡萄糖转运蛋白10(GLUT10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
抗体英文名称 Rattus norvegicus (Rat) 葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 葡萄糖氧化酶(GOD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 葡萄糖磷酸变位酶5(PGM5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T


 
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