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小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)elisa试剂盒说明书​

点击次数:297 发布时间:2022/5/6
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小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)elisa试剂盒说明书



ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:


1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。


2、研究抗酶抗体的合成。


3、显现微量的免疫沉淀反应。


4、定量检测体液中抗原或抗体成份。


 小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)elisa试剂盒说明书组成 :


试剂盒组成      48孔配置            96孔配置            保存


说明书             1份                1份  


封板膜          2片(48)          2片(96)   


密封袋             1个                1个  


酶标包被板        1×48             1×96            2-8℃保存


标准品          0.3ml×6瓶         0.3ml×6瓶         2-8℃保存


标准品稀释液    3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


检测抗体-HRP    5ml×1瓶           10ml×1瓶          2-8℃保存


显色剂A液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


显色剂B液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


终止液          3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


20*洗涤缓冲液   25ml×1瓶          15ml×1瓶          2-8℃保存



小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)elisa试剂盒说明书需自备的设备及试剂:


1.450±10nm滤光片酶标仪(建议仪器使用前预热)


2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.


3.Eppendorf 移液器.


4.蒸馏水或去离子水.


5.脱脂棉吸水纸.


6.37℃恒温箱.


7.100ml和1000ml量筒.


8.准备若干个标准品稀释管.


 

注意事项


1.试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存。实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。


2.加样:加样时,要控制加样速度,避免*孔与zui后一孔之见的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性;一般加样时间控制在10分钟内,如果样本数量过多,可使用多道移液器。


3.孵育:样品要在密闭的容器内进行孵育,严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。


4.洗涤:洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,同时要消除板底残留的液体和手指痕迹,避免影响zui后的酶标仪读数。


5.反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,10分钟左右),如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。


6.建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。


7.建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。


 

小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)elisa试剂盒说明书操作步骤


1. 取出试剂盒,于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。


2. 取出酶标板,按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。


3. 空白微孔中加入50μl的样品,空白对照加入50μl的蒸馏水;


4. 在样品孔中加入10μl的生wu素;(不含空白对照孔,切忌:生wu素只加样品孔!)


5. 在各孔中加入100μl的酶标记溶液;(不含空白对照孔)


6. 将酶标板用封口胶密封后,37℃孵育反应 1小时;(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)


7. 充分清洗酶标板3-5次,保持各孔有充足的水压;(浓缩洗涤液以1:100的比例与蒸馏水稀释)


8. 酶标板洗涤后用吸水纸*拍干;


9. 各孔加入显色剂A、B液各50μl;(不含空白对照孔)


10. 20-25℃下避光反应15分钟;


11.各孔加入50μl终止液,终止反应;


结果判断


1. 30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;


2. 以OD值为纵坐标,以标准品的浓度为横坐标,绘制曲线图;


3. 根据样品的OD值查找对应的浓度范围;


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